本文關(guān)鍵詞：miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15生物學(xué)功能影響的研究

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【摘要】：目的:口腔鱗癌(oral squamous cell carcinomas OSCC)是口腔頜面部常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率約占口腔頜面部惡性腫瘤的80%以上~[1],且呈逐年不斷上升的趨勢。目前臨床上口腔鱗癌的治療方法主要包括手術(shù)切除、放療、化療、生物治療等,但療效不佳,預(yù)后較差。因此,探索口腔鱗癌新的治療方法對口腔鱗癌患者的預(yù)后有十分重要的意義。Ambros等~[2]于1993年在線蟲體內(nèi)發(fā)現(xiàn)第一個micro RNA(miRNA),即line-4,其參與調(diào)節(jié)了線蟲的發(fā)育進程。Calin等~[3]于2002年最先報道了miRNA在腫瘤發(fā)生中的作用。此后不斷有研究證明miRNA在腫瘤細胞增殖、分化、凋亡過程中起到了十分重要的作用。因此,miRNA成為腫瘤診治新的研究方向。miRNA-222是miRNA家族中重要的一員,研究發(fā)現(xiàn),miRNA-222在多種腫瘤中表達異常,且miRNA-222的異常表達影響到腫瘤細胞的增殖、凋亡及遷移等生物學(xué)功能。龐新亞等~[4]發(fā)現(xiàn)miRNA-221、miRNA-222在肝癌組織中表達上調(diào);陶宣辰等~[5]在Hep G2肝癌細胞系體外實驗中發(fā)現(xiàn),上調(diào)miRNA-222的表達時,PTEN表達受到抑制,Hep G2細胞的增殖和侵襲能力增強。Gillies和Lorimer L[6]在腦膠質(zhì)細胞瘤的研究中發(fā)現(xiàn),miRNA-221/222可以與p27~(kipl) m RNA的3'-UTR結(jié)合,降低p27~(kipl)的表達。當(dāng)下調(diào)腦膠質(zhì)瘤細胞中miRNA-221/222的表達時,p27~(kipl)的蛋白表達量上調(diào),明顯地將腦膠質(zhì)細胞瘤U251細胞株阻滯在G1期,降低膠質(zhì)細胞瘤細胞U251的增殖。本實驗通過研究miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15增殖、凋亡及遷移等生物學(xué)功能的影響,探討miRNA-222在口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為口腔鱗癌的早期診斷、治療及預(yù)后提供參考依據(jù)。方法:1口腔鱗癌細胞株OSCC-15的復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代及凍存。2將人工合成的miRNA-222抑制物(inhibitor)及miRNA-222模擬物(mimics)瞬時轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細胞株OSCC-15,同時設(shè)置空白對照組。3 MTS試劑盒分別于0h、24h、48h、72h處理各組細胞,酶標儀檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞的吸光度值,并繪制細胞增殖曲線。4應(yīng)用Annexin V/PI雙染試劑盒處理各組細胞,流式細胞術(shù)分別檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞凋亡率。5細胞劃痕實驗檢測miRNA-222 inhibitor組、miRNA-222 mimics組及空白對照組三組細胞遷移率。6結(jié)果判定及統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,口腔鱗癌細胞株OSCC-15細胞的吸光度值以均數(shù)±標準差(X±S)表示,采用完全隨機的兩獨立樣本t檢驗比較各組細胞吸光度值的差異,采用χ2檢驗比較各組細胞凋亡率的差異,采用完全隨機的兩獨立樣本t檢驗比較各組遷移率間的差異,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1 miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15吸光度和增殖率的影響1.1 0h時,空白對照組的吸光度值為1.318±0.061,miRNA-222inhibitor組的吸光度值為1.141±0.040,miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);miRNA-222 mimics組的吸光度值為1.594±0.138,miRNA-222 mimics組較空白對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.2 24h時,空白對照組的吸光度值為2.128±0.150,miRNA-222inhibitor組的吸光度值為1.733±0.130,miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);miRNA-222 mimics組的吸光度值為2.752±0.106,miRNA-222 mimics組較空白對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。1.3 48h時,空白對照組的吸光度值為2.426±0.124,miRNA-222inhibitor組的吸光度值為2.155±0.057,miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);miRNA-222 mimics組的吸光度值為2.791±0.125,miRNA-222 mimics組較空白對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.4 72h時,空白對照組的吸光度值為2.806±0.163,miRNA-222 inhibitor組的吸光度值為2.423±0.053,miRNA-222 inhibitor組較空白對照組降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);miRNA-222 mimics組的吸光度值為3.369±0.409,miRNA-222 mimics組較空白對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。1.5 miRNA-222 inhibitor組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是85.57%、81.44%、88.83%、86.35%,低于空白對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);miRNA-222 mimics組0h、24h、48h、72h的增殖率分別是120.94%、129.32%、115.04%、163.54%,高于空白對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2 miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15凋亡的影響miRNA-222 inhibitor組的細胞凋亡率為9.58%,高于空白對照組的細胞凋亡率6.11%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);miRNA-222 mimics組的細胞凋亡率為2.25%,低于空白對照組的細胞凋亡率6.11%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。3 miRNA-222對口腔鱗癌細胞株OSCC-15遷移的影響24h,48h,72h,miRNA-222 inhibitor組的遷移率分別是17.9%、19.4%、20.6%,空白對照組的遷移率分別是23.7%、29.4%、36.4%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。miRNA-222 mimics組的遷移率分別是47.9%、67.8%、78.9%,miRNA-222 mimics組與空白對照組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:miRNA-222促進口腔鱗癌細胞株OSCC-15增殖及遷移,抑制細胞凋亡,推測miRNA-222在口腔鱗癌的增殖、凋亡及遷移功能中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗癌 miRNA-222 細胞增殖 細胞凋亡 細胞遷移
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.85
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-22
• 附表22-23
• 討論23-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻28-31
• 綜述 口腔癌中miRNA的研究進展31-41
• 參考文獻37-41
• 致謝41-42
• 個人簡歷42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李月秀;楊婭;肖長杰;高德安;高靜;;目標miRNAs在口腔白斑癌變患者唾液中的表達研究[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2015年07期

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3 李擊;王萍;岑紅兵;肖軍;;miR-17-5p在口腔鱗狀細胞癌中的表達特點及其臨床意義[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2015年05期

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本文編號：721043