發(fā)布時間：2017-08-20 20:15

  本文關鍵詞：腫瘤相關巨噬細胞誘導口腔癌細胞上皮間質轉化并促其侵襲轉移的機制研究

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【摘要】：口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)為最常見的口腔惡性腫瘤,癌細胞的侵襲轉移與其不良預后密切相關。近年來研究發(fā)現(xiàn)腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages,TAMs)參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉移,研究證實TAMs可誘導多種腫瘤細胞發(fā)生上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),進而促其侵襲轉移,然而TAMs在口腔癌侵襲轉移中的作用及其機制尚不明確。因此我們以口腔癌為研究對象,研究TAMs對口腔癌細胞侵襲轉移能力的影響及其相關作用機制。研究目的:明確腫瘤相關巨噬細胞能否誘導口腔癌細胞發(fā)生EMT進而促其侵襲轉移并初步探討TAMs誘導EMT的生物學機制。材料與方法:首先用佛波脂(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和巨噬細胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激人單核/巨噬細胞株(THP-1)促其形成TAMs并對其進行熒光標記鑒定,收集其上清液作為TAMs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)口腔癌細胞HN4、HN6和SCC9,并對收集的TAMs條件培養(yǎng)基進行質譜蛋白全譜分析;其次我們采用數(shù)字基因表達譜分析初步評測TAMs作用下SCC9差異基因的表達情況,再采用實時熒光定量PCR、免疫蛋白印記技術和免疫熒光的方法分別從mRNA和蛋白質以及熒光標記的水平檢測TAMs作用后三種口腔癌細胞上皮和間質標記物的表達改變,在此基礎上,利用細胞劃痕實驗、流式細胞周期測定和細胞侵襲實驗檢測三種口腔癌細胞的生物學特性改變;最后,通過RT-PCR檢測三種口腔癌細胞轉錄抑制因子的表達情況并應用Western Blot方法檢測炎癥重要通路NF-κB的激活狀態(tài)等來探討TAMs誘導口腔癌細胞EMT及促其侵襲轉移的具體機制。結果:首先成功體外誘導TAMs,表現(xiàn)為原本懸浮分散于培養(yǎng)基中的細胞貼壁成簇,部分細胞伸出偽足,巨噬細胞標記物CD68和腫瘤相關巨噬細胞標記物CD163均有明顯表達,并檢測出TAMs條件培養(yǎng)基中含有多種炎癥因子與趨化因子;其次,TAMs誘導三種口腔癌細胞HN4、HN6和SCC9發(fā)生了EMT,主要表現(xiàn)為:TAMs誘導鋪路石樣的口腔癌上皮細胞逐漸拉長轉變?yōu)轭愃朴诔衫w維細胞的細胞形態(tài);無論從mRNA水平,還是從蛋白質水平,上皮標志物E-cadherin表達下降,同時間質標志物Vimentin的表達明顯上升,同時TAMs可明顯促進三種口腔癌細胞HN4、HN6和SCC9侵襲轉移能力。最后,TAMs可能是通過調控轉錄抑制因子Snail,ZEB和Twist以及激活炎癥信號通路NF-κB來促進口腔癌EMT的發(fā)生。結論:1.體外成功構建腫瘤相關巨噬細胞(TAMs)。2.TAMs可以誘導HN4、HN6及SCC9發(fā)生上皮間質轉化(EMT)并顯著增強其侵襲、遷移能力。3.TAMs促進了HN4、HN6及SCC9中轉錄抑制因子Snail,Twist,ZEB的表達并激活了三種口腔癌細胞中NF-κB信號通路。
【關鍵詞】：腫瘤相關巨噬細胞 口腔癌細胞 EMT 侵襲轉移
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.85
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 1.材料和方法13-26
• 2 結果26-41
• 3.討論41-48
• 4 結論48-49
• 參考文獻49-56
• 綜述56-71
• 參考文獻65-71
• 中英文縮略詞對照表71-73
• 攻讀學位期間發(fā)表文章等情況73-74
• 致謝74

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本文編號：708636