本文關鍵詞：原位可注射殼聚糖基溫敏水凝膠支架負載殼聚糖納米粒對pDNA-BMP2體外緩釋性能及穩(wěn)定性的評價

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【摘要】：目的:本實驗采用離子交聯(lián)法制備含骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2質(zhì)粒DNA(p DNA-BMP2)的殼聚糖納米粒,即CSn(p DNA-BMP2),將其與原位可注射殼聚糖基溫敏水凝膠支架(CS/α,β-GP)混合,制備CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合溫敏體系,評價該體系對p DNA-BMP2的體外緩釋性能及穩(wěn)定性。方法:1.離子交聯(lián)法制備CSn(p DNA-BMP2),透射電鏡(TEM)觀察其微觀形態(tài);0.8%瓊脂糖凝膠電泳分析CSn與p DNA-BMP2結合能力;高速離心法檢測CSn對p DNA-BMP2的包封率及載藥率。2.采用物理交聯(lián)制備CS/α,β-GP溫敏水凝膠,磁力攪拌下將CSn(p DNA-BMP2)分散于CS/α,β-GP,構建出復合體系CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP。試管倒置法檢測復合體系的溫敏特性;掃描電鏡(SEM)觀察復合體系的微觀形態(tài);稱重法檢測CS/α,β-GP水凝膠的體外溶脹和降解性能。3.以PBS和人工唾液作為釋放介質(zhì),考察37℃條件下CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合體系對p DNA-BMP2的釋藥動力學。4.選擇釋釋放介質(zhì)為人工唾液并釋放時間長的的樣品A、B、C、D,濃度均調(diào)至0.4μg/m L,通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌實驗及基因測序來檢測該復合體系對重組質(zhì)粒p DNA-BMP2的結構穩(wěn)定性的影響。結果:1.TEM顯示CSn分散良好,為規(guī)則球形,粒徑約為200nm;CSn(p DNA-BMP2)粒徑略有增大,約為500nm。瓊脂糖凝膠電泳顯示CSn可以有效地結合p DNA-BMP2,且兩實驗組的包封率和載藥率分別均高于80%和30%。2.CS/α,β-GP在37℃條件下溶膠-凝膠變相時間為5min,CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合體系的凝膠時間減少至3min;SEM顯示CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合水凝膠呈網(wǎng)狀交聯(lián)結構,CSn(p DNA-BMP2)可鑲嵌在該支架上;CS/α,β-GP在p H 4.0介質(zhì)中的溶脹率和降解率高于p H 6.8的介質(zhì)。3.體外釋放結果顯示,在相同釋放介質(zhì)及p H值條件下,復合體系對p DNA-BMP2的緩釋效果優(yōu)于CSn;在不同釋放介質(zhì)及p H的條件下,DNA的累計釋放率在p H 4.0的條件下高于p H 6.8的條件。4.質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗結果顯示,4個樣品的轉(zhuǎn)化效率均高于對照組;基因測序分析顯示未發(fā)生DNA序列發(fā)生插入、缺失、重排、修飾等現(xiàn)象。結論:1.CSn具有良好的形態(tài),合適的粒徑大小,可以有效地結合p DNA-BMP2,具有較高的包封率和載藥率。2.CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合體系具有溫敏特性及網(wǎng)絡交聯(lián)結構,可以負載CSn(p DNA-BMP2),具有良好的溶脹性、降解性及緩釋性能。3.CS/CSn(p DNA-BMP2)-GP復合體系能夠保持p DNA-BMP2的結構穩(wěn)定性,為其以后的功能性奠定基礎。
【關鍵詞】：殼聚糖 溫敏水凝膠 納米粒 pDNA-BMP2 緩釋
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R781.4
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-9
• 第1章 材料與方法9-16
• 1.1 主要實驗材料與試劑9
• 1.2 主要儀器與設備9-10
• 1.3 實驗方法10-16
• 1.3.1 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系的制備10-11
• 1.3.2 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系的性質(zhì)檢測11-13
• 1.3.2.1 CSn的TEM觀察11
• 1.3.2.2 CSn與pDNA-BMP2結合能力的鑒定11
• 1.3.2.3 CSn(pDNA-BMP2)包封率及載藥率的測定11-12
• 1.3.2.4 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的溫敏特性12
• 1.3.2.5 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的SEM觀察12
• 1.3.2.6 CS/α,β-GP的體外溶脹及降解性能12-13
• 1.3.3 質(zhì)粒pDNA-BMP2體外釋放實驗13
• 1.3.4 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP對pDNA-BMP2結構穩(wěn)定性檢測13-15
• 1.3.5 統(tǒng)計分析處理15-16
• 第2章 結果16-24
• 2.1 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP復合體系的性質(zhì)檢測16-20
• 2.1.1 CSn的TEM16
• 2.1.2 CSn與pDNA-BMP2結合能力的鑒定16-17
• 2.1.3 CSn(pDNA-BMP2)包封率及載藥率的測定17-18
• 2.1.4 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的溫敏特性18-19
• 2.1.5 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP的SEM觀察19
• 2.1.6 CS/α,β-GP的體外溶脹及降解性能19-20
• 2.2 質(zhì)粒pDNA-BMP2體外釋放實驗20-21
• 2.3 CS/CSn(pDNA-BMP2)-GP對pDNA-BMP2結構穩(wěn)定性檢測21-24
• 第3章 討論24-26
• 第4章 結論26-27
• 參考文獻27-30
• 綜述30-42
• 綜述參考文獻39-42
• 攻讀學位期間的研究成果42-43
• 致謝43-44

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：700774