本文關(guān)鍵詞：吸煙影響口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能及其機(jī)制的研究

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【摘要】：第一部分 吸煙對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能的影響[目的] 吸煙可削弱呼吸道和胃腸道黏膜的防御功能,導(dǎo)致致病微生物的感染。然而,有關(guān)吸煙影響口腔黏膜防御功能的研究較少。本研究旨在觀察吸煙對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能的影響。[方法]通過免疫組化染色結(jié)合圖像分析比較吸煙者與非吸煙者的正�？谇火つ�、口腔白斑上皮組織中核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域1 (nucleotide-binding oligomerization domain 1, NODI)、人β防御素(human beta defensins, hBDs)和半胱氨酸-天冬氨酸特異性蛋白酶(cysteinyl aspartate-specific proteases, Caspase)-12表達(dá)水平的差異。聯(lián)合應(yīng)用HE染色、真菌嗜銀染色和抗白色念珠菌抗體免疫組化染色,檢測(cè)正�？谇火つず涂谇话装呓M織的白色念珠菌,比較非吸煙組和吸煙組之間陽性率的差異。[結(jié)果] 吸煙組正�？谇火つず涂谇话装呱掀そM織中NOD1、hBD-1和hBD-3的表達(dá)水平均明顯低于相應(yīng)的非吸煙組,而吸煙組正�？谇火つず涂谇话装呱掀そM織中hBD-2和Caspase-12的表達(dá)水平均明顯高于相應(yīng)的非吸煙組。吸煙組正�？谇火つず涂谇话装甙咨钪榫栃月示黠@高于相應(yīng)的非吸煙組。[結(jié)論] 吸煙可降低口腔黏膜上皮細(xì)胞的防御功能,增加白色念珠菌的感染。第二部分Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能中的作用[目的]Caspase-12是炎癥相關(guān)性Caspase家族的重要成員,在固有免疫防御反應(yīng)的調(diào)控中起關(guān)鍵作用,可削弱腸道黏膜防御功能。本研究旨在觀察香煙煙霧提取物(cigarette smoke extract; CSE)對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞Caspase-12表達(dá)的影響,探究Caspase-12在CSE影響口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能中的作用。[方法] 采用CSE對(duì)永生化口腔黏膜上皮細(xì)胞系Leuk-1進(jìn)行處理,ELISA法檢測(cè)hBD-1、hBD-2和hBD-3分泌水平的變化,并將培養(yǎng)上清孵育白色念珠菌,通過平板接種菌落計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)CSE處理后培養(yǎng)上清抗白色念珠菌活性的改變。同時(shí)采用免疫印記法檢測(cè)CSE對(duì)Caspase-12表達(dá)水平的影響。在此基礎(chǔ)上,通過RNA干擾誘導(dǎo)Caspase-12表達(dá)沉默。在CSE處理細(xì)胞后,采用熒光定量PCR法檢測(cè)hBD-1、 hBD-2和hBD-3的：uRNA表達(dá)水平；采用ELISA法檢鋇hBD-1、hBD-2和hBD-3的分泌水平；將培養(yǎng)上清孵育白色念珠菌,通過平板接種菌落計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)培養(yǎng)上清抗白色念珠菌的活性,比較Caspase-12 siRNA組和對(duì)照siRNA組之間的差異。[結(jié)果] CSE明顯降低了hBD-1和hBD-3的分泌水平,升高了hBD-2的分泌水平。CSE處理后細(xì)胞培養(yǎng)上清抗白色念珠菌活性明顯降低。CSE明顯增強(qiáng)了Caspase-12的蛋白表達(dá)。Caspase-12表達(dá)沉默明顯逆轉(zhuǎn)了CSE對(duì)hBD-1和hBD-3mRNA表達(dá)和分泌水平的抑制作用,明顯增強(qiáng)了CSE對(duì)hBD-2 mRNA表達(dá)和分泌水平的誘導(dǎo)作用。Caspase-12表達(dá)沉默顯著提高了CSE處理后細(xì)胞培養(yǎng)上清的抗白色念珠菌活性。[結(jié)論] CSE可增強(qiáng)口腔黏膜上皮細(xì)胞Caspase-12的表達(dá),Caspase-12在CSE抑制口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能和增加白色念珠菌感染中發(fā)揮重要作用。第三部分Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細(xì)胞NOD1表達(dá)水平中的調(diào)控作用[目的] NOD1是重要的胞內(nèi)模式識(shí)別受體,在口腔黏膜防御功能和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)維持中起重要作用。以往研究表明,CSE通過調(diào)控NOD1通路影響其下游hBDs的表達(dá)和分泌。本研究旨在觀察CSE對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞NOD1表達(dá)的影響,探討Caspase-12在CSE影響口腔黏膜上皮細(xì)胞NOD1表達(dá)水平中的調(diào)控作用。[方法] 免疫印記法檢測(cè)CSE處理對(duì)NOD1表達(dá)水平的影響。觀察Caspase-12表達(dá)沉默對(duì)NOD1表達(dá)水平的影響。采用免疫共沉淀和免疫熒光雙染法研究Caspase-12與NOD1的相互作用關(guān)系。在CSE處理細(xì)胞后,采用免疫印記法檢測(cè)NOD1的表達(dá)水平,比較Caspase-12 siRNA組和對(duì)照siRNA組之間的差異。[結(jié)果] CSE明顯抑制了NOD1的蛋白表達(dá)。Caspase-12表達(dá)沉默明顯上調(diào)了NOD1的蛋白表達(dá)水平。Caspase-12與NOD共定位表達(dá),存在蛋白相互作用。Caspase-12表達(dá)沉默部分逆轉(zhuǎn)了CSE對(duì)NOD1蛋白表達(dá)的抑制作用。[結(jié)論] CSE可抑制口腔黏膜上皮細(xì)胞NOD1的表達(dá),Caspase-12對(duì)NOD1表達(dá)水平的調(diào)控可能與CSE對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能的抑制作用有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：吸煙 口腔黏膜 NOD1 人β防御素 白色念珠菌 香煙煙霧提取物 口腔黏膜 Caspase-12 人β防御素 白色念珠菌 香煙煙霧提取物 口腔黏膜 Caspase-12 NOD1
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R781
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮略詞表11-13
• 緒論13-22
• 第一部分 吸煙對(duì)口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能的影響22-52
• 一、材料與方法23-27
• 二、結(jié)果27-47
• 三、討論47-52
• 第二部分 Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細(xì)胞防御功能中的作用52-78
• 一、材料與方法53-64
• 二、結(jié)果64-75
• 三、討論75-78
• 第三部分 Caspase-12在香煙煙霧提取物影響口腔黏膜上皮細(xì)胞NOD1表達(dá)水平中的調(diào)控作用78-97
• 一、材料與方法79-90
• 二、結(jié)果90-94
• 三、討論94-97
• 參考文獻(xiàn)97-106
• 結(jié)論106-107
• 綜述107-116
• 參考文獻(xiàn)112-116
• 附錄 已發(fā)表文章目錄116-118
• 致謝118-119

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本文編號(hào)：688355