本文關(guān)鍵詞：檸檬醛對(duì)雞胚唇部組織形態(tài)發(fā)育和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8時(shí)空表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 雞胚 檸檬醛 唇裂 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8 整胚原位雜交 mRNA探針

【摘要】：目的本研究通過(guò)載體微珠將檸檬醛植入正常發(fā)育的20期雞胚鼻窩組織中,建立雞胚唇裂模型；制備地高辛標(biāo)記的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8(FGF8)RNA探針,通過(guò)整胚原位雜交的方法檢測(cè)雞胚唇部發(fā)育和唇裂發(fā)生過(guò)程中FGF8基因時(shí)空表達(dá)的變化,探索FGF8在唇裂發(fā)生中機(jī)理,為早期發(fā)現(xiàn)預(yù)防唇裂提供理論依據(jù)。方法1. FGF8 RNA探針的制備本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用Marion WassefPhD惠贈(zèng)的雞FGF8/pBluescript KS Ⅱ (+)重組質(zhì)粒,EcoRI、Xhol限制性內(nèi)切酶酶切得到線性化DNA模板,利用pBluescrip tKSⅡ(+)載體中的T3、T7RNA聚合酶上的啟動(dòng)子,體外轉(zhuǎn)錄合成地高辛標(biāo)記的FGF8正、反義RNA探針。探針的合成為后續(xù)的整胚原位雜交試驗(yàn)做好了準(zhǔn)備。2.各個(gè)時(shí)期雞胚的收集將正常發(fā)育的20期雞胚隨機(jī)分為3組,分別是實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、正常空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組(CT組)：20期雞胚右側(cè)鼻窩外胚層上植入攜帶0.6g/mL濃度的檸檬醛微珠；陰性對(duì)照組(DMSO組)：20期雞胚右側(cè)鼻窩外胚層植入浸泡于DMSO中的微珠；空白對(duì)照組：20期雞胚未經(jīng)任何處理。3組分別收集20期至28期每期5只雞胚。3.整胚原位雜交檢測(cè)FGF8基因mRNA的時(shí)空表達(dá)通過(guò)整胚原位雜交的方法檢測(cè)雞胚唇部發(fā)育和唇裂發(fā)生過(guò)程中FGF8基因的時(shí)空表達(dá)變化。結(jié)果1、體外成功轉(zhuǎn)錄獲得正、反義雞的FGF8 RNA探針。2、正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)三者唇部發(fā)育無(wú)明顯差別。正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)雞胚20期微珠植入1h后,鼻板凹陷形成淺窩；22期時(shí)面部各突起已經(jīng)形成,由額鼻突、側(cè)鼻突、上頜突圍成鼻窩；24期內(nèi)外側(cè)鼻突與上頜突圍成的鼻縫較寬,并與下頜突一起圍成了口凹；隨時(shí)間推移,各突起逐漸發(fā)育并接觸融合,兩側(cè)對(duì)稱邊緣連續(xù)。20期+1hCT組實(shí)驗(yàn)側(cè)未觀察到明顯異常；22期開(kāi)始觀察到上頜突、側(cè)鼻突出現(xiàn)發(fā)育異常,上頜突及內(nèi)外側(cè)鼻突發(fā)育缺損,體積較正常組明顯縮小,突起融合發(fā)生障礙。3、FGF8的表達(dá)在雞胚頜面部呈動(dòng)態(tài)性,正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)三者頜面部FGF8的表達(dá)無(wú)明顯差別。正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)中可觀察到20期+1h時(shí)FGF8在額鼻區(qū)和鼻窩內(nèi)側(cè)邊緣廣泛高表達(dá),上頜突的下緣和尾端及下頜突的外側(cè)上緣也呈高表達(dá)；隨著頜面部的發(fā)育,22期FGF8的表達(dá)局限在額鼻突中央、內(nèi)側(cè)鼻突、上頜突下緣及下頜突的上緣；內(nèi)側(cè)鼻突的表達(dá)在24期擴(kuò)展至外側(cè)鼻突,額鼻突中央及下頜突表達(dá)消失；24期后FGF8的表達(dá)開(kāi)始下降,28期FGF8在突起接觸融合處表達(dá)明顯降低甚至消失。20期+1hCT組實(shí)驗(yàn)側(cè)FGF8的表達(dá)未觀察到明顯異常；22期至24期側(cè)鼻突FGF8的表達(dá)較正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)下降；26期及28期側(cè)鼻突與上頜突融合處FGF8的表達(dá)較正常組、DMSO組和CT組正常側(cè)高。結(jié)論1、制備的FGF8反義RNA探針具有較高的特異性,能有效的檢測(cè)FGF8基因的表達(dá)。2、檸檬醛可影響雞胚唇部組織FGF8的表達(dá),FGF8表達(dá)的變化影響雞胚唇部的發(fā)育,提示FGF8在唇部發(fā)育和唇缺損畸形發(fā)生過(guò)程中具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：雞胚 檸檬醛 唇裂 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8 整胚原位雜交 mRNA探針
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R782.2
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 第一節(jié) 地高辛標(biāo)記雞FGF8基因RNA探針的制備16-32
• (1) 材料16-19
• (2) 方法19-25
• (3) 結(jié)果25-27
• (4) 討論27-31
• (5) 結(jié)論31-32
• 第二節(jié) 檸檬醛對(duì)雞胚唇部組織形態(tài)發(fā)育和FGF8的時(shí)空表達(dá)的影響32-52
• (1) 材料32-36
• (2) 方法36-40
• (3) 結(jié)果40-44
• (4) 討論44-50
• (5) 結(jié)論50-52
• (6) 問(wèn)題及展望52
• 參考文獻(xiàn)52-62
• 附錄62-63
• 綜述63-76
• 參考文獻(xiàn)69-76
• 致謝76-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文77

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本文編號(hào)：683266