本文關(guān)鍵詞：經(jīng)hBMP-2基因修飾的兔BMSCs生物學(xué)活性研究

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【摘要】：背景:下頜骨是位于面部下1/3的不規(guī)則骨,參與咀嚼、咬合、吞咽等重要生理活動(dòng)。下頜骨的缺損修復(fù)一直是頜面外科研究的熱點(diǎn)之一。隨著組織工程學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,下頜骨缺損后修復(fù)重建的治療方法也得到了極大的進(jìn)步。其中,組織工程骨技術(shù)因在下頜骨修復(fù)重建中展現(xiàn)出顯著的優(yōu)越性,已經(jīng)逐漸得到廣泛的認(rèn)可。在組織工程學(xué)中,種子細(xì)胞、支架材料、細(xì)胞因子是其三大要素,而獲得具有良好生物學(xué)活性的種子細(xì)胞是組織工程研究的基礎(chǔ)性環(huán)節(jié)。本研究擬通過(guò)RT-PCR技術(shù)從人肝癌細(xì)胞系HepG2中獲取并擴(kuò)增人骨形態(tài)蛋白-2(hBMP-2)基因片段,通過(guò)酶切等技術(shù)將其插入至骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)基因組中,從而增強(qiáng)BMP基因的表達(dá)活性,加快骨質(zhì)缺損區(qū)域的修復(fù)重建,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。目的:初步分離培養(yǎng)生長(zhǎng)狀態(tài)良好的兔BMSCs,檢測(cè)經(jīng)BMP-2基因修飾后,BMSCs中目的基因的表達(dá)水平,并探討將其作為種子細(xì)胞修復(fù)骨缺損的可行性。方法:通過(guò)密度梯度離心法分離培養(yǎng)兔BMSCs,并初步檢測(cè)BMSCs生物學(xué)特性。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),從HepG2細(xì)胞中分離獲取hBMP-2基因片段。目的基因片段經(jīng)擴(kuò)增后與載體連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒經(jīng)慢病毒載體,并通過(guò)293T細(xì)胞介導(dǎo)轉(zhuǎn)染BMSCs,檢測(cè)轉(zhuǎn)染后BMSCs細(xì)胞中BMP-2基因的mRNA和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:通過(guò)密度梯度離心法分離培養(yǎng),得到生長(zhǎng)狀況良好,可以穩(wěn)定傳代的兔BMSCs;通過(guò)目的基因的提取、擴(kuò)增及連接等實(shí)驗(yàn)過(guò)程成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒載體,并成功轉(zhuǎn)入兔BMSCs;經(jīng)基因修飾的兔BMSCs具有向成骨方向分化的能力;經(jīng)基因修飾的兔BMSCs中BMP蛋白表達(dá)量明顯增加。結(jié)論:經(jīng)目的基因修飾的兔BMSCs表現(xiàn)出良好生物學(xué)活性,為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 骨形態(tài)發(fā)生蛋白 慢病毒 基因
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R782.2
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略詞表10-11
• 第一章 兔BMSCs的分離培養(yǎng)及其分化的研究11-20
• 1 材料與方法11-13
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果13-18
• 3 討論18-19
• 參考文獻(xiàn)19-20
• 第二章 BMP-2 慢病毒載體的構(gòu)建20-32
• 1 材料與方法20-25
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-30
• 3 討論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-32
• 第三部分hBMP-2 基因轉(zhuǎn)染BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究32-42
• 1 材料與方法32-36
• 2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 3 討論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-42
• 結(jié)論42-43
• 綜述 組織工程骨在頜面骨缺損修復(fù)中的應(yīng)用43-56
• 參考文獻(xiàn)53-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文56-57
• 致謝57

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