本文關(guān)鍵詞：“七葉一枝花—?dú)ぞ厶恰被旌衔镒鳛榱x齒穩(wěn)固劑的生物相容性研究

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【摘要】：目的通過檢測(cè)“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞L929的細(xì)胞毒性、細(xì)胞周期和凋亡的影響及對(duì)金黃地鼠口腔黏膜的刺激性,評(píng)價(jià)其生物相容性,為臨床探索新的義齒穩(wěn)固劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1“七葉一枝花-殼聚糖”混合物及浸提液的制備:將經(jīng)水煎法提純的七葉一枝花粉劑0.156g溶于100ml純水中攪拌溶解,在連續(xù)攪拌下緩慢加入經(jīng)γ射線消毒后的水溶性殼聚糖2g,攪拌混勻后得到淺棕色透明混合物,每次實(shí)驗(yàn)均需配制新溶劑。以含10%胎牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基為浸提介質(zhì),將“七葉一枝花-殼聚糖”混合物按0.1g/ml的標(biāo)準(zhǔn)放入浸提介質(zhì)中,37℃條件下、浸提24h。2L929細(xì)胞培養(yǎng)及繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線:細(xì)胞復(fù)蘇后,用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞并傳代。將細(xì)胞制成10種不同濃度的細(xì)胞懸液接種于96孔板進(jìn)行培養(yǎng),分別在培養(yǎng)24h、48h、72h、96h、120h、144h和168h后用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法測(cè)其光密度值(OD值),根據(jù)各組均值繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。3 MTT實(shí)驗(yàn):用根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線確定的最佳細(xì)胞濃度接種96孔板,MTT比色法測(cè)定不同濃度“七葉一枝花-殼聚糖”混合物的浸提液培養(yǎng)L929細(xì)胞24h、48h、72h和96h的OD值,統(tǒng)計(jì)分析不同濃度浸提液在不同時(shí)間對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響。4細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn):利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)陰性對(duì)照組、“七葉一枝花-殼聚糖”混合物浸提液組培養(yǎng)細(xì)胞48h后L929細(xì)胞周期的差異。5細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn):陰性對(duì)照組、“七葉一枝花-殼聚糖”混合物浸提液組培養(yǎng)細(xì)胞48h后,分別對(duì)細(xì)胞進(jìn)行Annexin V,PI雙染色,利用流式細(xì)胞儀測(cè)定各組的細(xì)胞凋亡率。6口腔粘膜刺激試驗(yàn):制備“七葉一枝花-殼聚糖”混合物及浸提液,10只金黃地鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,分別將浸有“七葉一枝花-殼聚糖”混合物的浸提液、p H為2的醋酸和生理鹽水的棉球置于地鼠中央頰粘膜極低處,分別于1h、4h、6h、8h后肉眼觀察動(dòng)物有無不良反應(yīng);8h后處死動(dòng)物,取與試樣接觸部位頰粘膜及周圍結(jié)締組織,常規(guī)組織切片,HE染色觀察組織細(xì)胞有無炎性反應(yīng)。結(jié)果1細(xì)胞生長(zhǎng)曲線結(jié)果:通過細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制可知,本實(shí)驗(yàn)室條件下L929細(xì)胞在第三天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,第五天達(dá)到增殖頂峰,第七天進(jìn)入生長(zhǎng)平臺(tái)期,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈“S”形,細(xì)胞的最適生長(zhǎng)濃度為4×104/ml。2 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果:實(shí)驗(yàn)條件下,第一天,毒性級(jí)別除100%實(shí)驗(yàn)組為0級(jí)外,濃度25%、50%、75%、100%實(shí)驗(yàn)組及Protefix組均為1級(jí);第二天、第三天和第四天,濃度25%、50%、75%、100%實(shí)驗(yàn)組和Protefix組均出現(xiàn)1級(jí)毒性反應(yīng),有極輕微細(xì)胞毒性。3細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn):48h后細(xì)胞表現(xiàn)出不同的生長(zhǎng)趨勢(shì),兩組細(xì)胞均為正常二倍體細(xì)胞�！捌呷~一枝花-殼聚糖”混合物浸提液組G2期細(xì)胞周期比例為(7.95±0.58)%,陰性對(duì)照組G2期細(xì)胞周期比例為(8.20±0.32)%,兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞相容性良好。4細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn):“七葉一枝花-殼聚糖”混合物浸提液組早期凋亡率為(5.97±0.71)%,陰性對(duì)照組早期凋亡率為(5.90±1.16)%,兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5口腔粘膜刺激試驗(yàn):肉眼觀察實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組棉球接觸部位黏膜均未出現(xiàn)紅斑、糜爛、潰瘍;陽性對(duì)照組棉球接觸部位黏膜粗糙,白色皺褶,周圍組織紅腫。組織學(xué)檢查,實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組上皮完整,無炎細(xì)胞浸潤(rùn)、無水腫及血管充血;陽性對(duì)照組黏膜上皮可見水腫、膿腫、糜爛及慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變;固有層可見水腫,血管擴(kuò)張、充血及灶性慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論1本實(shí)驗(yàn)條件下,自制“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)體外培養(yǎng)的L929細(xì)胞的增殖無毒性作用。2與陰性對(duì)照組相比,“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)L929細(xì)胞周期和凋亡的影響無顯著性差異。3“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)金黃地鼠口腔黏膜無刺激性。說明“七葉一枝花-殼聚糖”混合物具有良好的生物相容性。
【關(guān)鍵詞】：七葉一枝花 殼聚糖 義齒穩(wěn)固劑 生物相容性
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮略表11-12
• 引言12-14
• 第1章 “七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)L929細(xì)胞增殖的影響14-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1.1 細(xì)胞株14
• 1.1.2 主要試劑與儀器14-15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.2.1 主要試劑的制備15
• 1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代15-16
• 1.2.3 建立細(xì)胞生長(zhǎng)曲線16
• 1.2.4 MTT法測(cè)定“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)L929細(xì)胞的毒性16-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-20
• 1.3.1 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的建立17-18
• 1.3.2“七葉一枝花-殼聚糖”混合物的毒性評(píng)級(jí)18-20
• 1.4 討論20-23
• 1.5 結(jié)論23-24
• 參考文獻(xiàn)24-27
• 第2章 “七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)L929細(xì)胞周期和凋亡的影響27-35
• 2.1 主要試劑與儀器27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-30
• 2.2.1 主要試劑的制備27-28
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代28
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組28
• 2.2.4 接種細(xì)胞28
• 2.2.5 細(xì)胞同步化28-29
• 2.2.6 用等量浸提液置換培養(yǎng)基29
• 2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)29
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29-30
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 2.3.1“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)細(xì)胞周期的影響30-31
• 2.3.2“七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響31
• 2.4 討論31-34
• 2.4.1 “七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)細(xì)胞周期的影響31-33
• 2.4.2 “七葉一枝花-殼聚糖”混合物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響33-34
• 2.5 結(jié)論34
• 參考文獻(xiàn)34-35
• 第3章 “七葉一枝花-殼聚糖”混合物的口腔黏膜刺激試驗(yàn)35-41
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料35
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物35
• 3.1.2 主要試劑與儀器35
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 3.2.1 主要試劑的制備35-36
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組36
• 3.2.3 肉眼觀察36
• 3.2.4 組織學(xué)觀察36-38
• 3.2.5 結(jié)果評(píng)價(jià)38
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-39
• 3.3.1 肉眼觀察38
• 3.3.2 組織學(xué)觀察38-39
• 3.4 討論39-40
• 3.5 結(jié)論40
• 參考文獻(xiàn)40-41
• 第4章 綜述 殼聚糖在口腔醫(yī)學(xué)中的研究進(jìn)展41-47
• 4.1 殼聚糖在口腔修復(fù)科中的應(yīng)用研究41-42
• 4.2 殼聚糖在牙體牙髓科中的研究42-43
• 4.3 殼聚糖在兒牙科中的應(yīng)用研究43
• 4.4 殼聚糖在口腔黏膜病科中的應(yīng)用研究43
• 4.5 殼聚糖在牙周科中的應(yīng)用研究43-44
• 4.6 殼聚糖在口腔外科中的應(yīng)用研究44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 結(jié)論47-48
• 附錄A48-55
• 附錄B55-57
• 致謝57-58
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介58-59
• 作者簡(jiǎn)介59-60
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集60

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本文編號(hào)：671654