本文關(guān)鍵詞：純鈦種植體表面生物礦化構(gòu)建及對(duì)骨結(jié)合影響的研究

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【摘要】：第一部分純鈦表面生物礦化處理工藝目的:純鈦種植體表面形貌是影響種植體骨結(jié)合的重要因素之一,生物活性羥基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)涂層技術(shù)結(jié)合了金屬材料和HA的優(yōu)點(diǎn),具有優(yōu)良的機(jī)械力學(xué)性能和生物活性,是常用的種植體表面處理方法。生物礦化是在生物體的嚴(yán)格控制下,從周圍環(huán)境中有選擇地吸收各種元素用于構(gòu)建生物體內(nèi)具有特殊功能的高度有序無機(jī)晶體結(jié)構(gòu)—礦物質(zhì)的過程。生物礦化的體外模擬采用模擬體液(Simulation body fluid,SBF)等礦化液,模仿生物體內(nèi)的結(jié)晶環(huán)境,以沉積無機(jī)礦物質(zhì)。SBF具有和人體血漿相似的離子濃度,在SBF環(huán)境中沉積的HA與人體骨無機(jī)質(zhì)成分、結(jié)構(gòu)相似,有較好的生物活性。富自體濃縮生長因子(Concentrated Growth Factors,CGF)纖維蛋白液為血液提取物,離子濃度與血漿相近,且富含與骨修復(fù)再生密切相關(guān)的纖維蛋白和多種高濃度生長因子,可使生物礦化過程更接近體內(nèi)環(huán)境。本部分研究采用噴砂-酸蝕(Sand Blast and Acid Etching,SLA)處理技術(shù)對(duì)鈦表面進(jìn)行預(yù)處理,分別使用SBF和CGF纖維蛋白液進(jìn)行生物礦化處理,制備出具有生物活性的礦化表面,通過掃描電鏡及X射線能譜儀觀察表面微形貌、測定微量元素組成。方法:1配置礦化液:按照Kokubo的模擬體液配方配制礦化液。2制備CGF纖維蛋白液:抽取beagle犬靜脈血9ml,Medifuge離心機(jī)離心,分離上層清亮液體,置于一次性密封塑料試管內(nèi)。3鈦片分組及制備純鈦片:圓形,直徑8mm,厚度1mm,粗糙度0.172μm。分為8組,每組3片:A組:機(jī)械加工組;B組:噴砂酸蝕組;C組:SBF 7天組,即機(jī)械加工的純鈦片置于SBF中,浸泡7天;D組:噴砂酸蝕+SBF 7天組,即噴砂酸蝕的純鈦片置于SBF中,浸泡7天;E組:SBF 14天組,即機(jī)械加工的純鈦片置于SBF中,浸泡14天;F組:噴砂酸蝕+SBF 14天組,即噴砂酸蝕的純鈦片置于sbf中,浸泡14天;g組:cgf組,即機(jī)械加工的純鈦片置于cgf中,浸泡7天;h組:噴砂酸蝕+cgf組,即噴砂酸蝕的純鈦片置于cgf中,浸泡7天4樣品表面形貌、元素分析、表面微孔微球分布及粗糙度使用sem-eds觀察鈦片表面形貌,分析表面微量元素;使用nanomeasure1.2測量表面孔徑、粒徑;使用粗糙度測試儀測量表面粗糙度。結(jié)果:1鈦片表面sem形貌:a組:鏡下見機(jī)械打磨劃痕排列整齊。b組:低倍鏡下可見鈦片表面呈蜂窩狀結(jié)構(gòu);高倍鏡下見鈦片表面為網(wǎng)狀多級(jí)孔洞結(jié)構(gòu),孔徑約0.2-4μm。c組:鏡下見機(jī)械打磨劃痕方向一致,未見明顯礦化沉積物存在。d組:低倍鏡下見鈦片表面呈蜂窩狀結(jié)構(gòu),可見少量礦化結(jié)節(jié);高倍鏡下鈦片表面見礦化結(jié)節(jié)不規(guī)則,粒徑約0.3-5μm。e組:低倍鏡下可見方向一致的劃痕,可見少量礦化結(jié)節(jié);高倍鏡下見礦化沉積物呈不規(guī)則片狀,粒徑約0.2-3μm。f組:低倍鏡下可見鈦片表面大面積球狀沉積物覆蓋;高倍鏡下見沉積物呈分散性好的多孔球狀,球徑約1-3μm,球體表面見細(xì)小針狀納米粒子,形成發(fā)達(dá)的多孔孔隙結(jié)構(gòu)。g組:低倍鏡下可見方向一致的劃痕,表面見少量礦化結(jié)節(jié);高倍鏡下見,礦化沉積物呈不規(guī)則高密度團(tuán)塊狀,粒徑約0.2-4μm。h組:低倍鏡下見鈦片呈現(xiàn)蜂窩狀結(jié)構(gòu),可見少量礦化結(jié)節(jié);高倍鏡下見礦化結(jié)節(jié)呈不規(guī)則團(tuán)塊狀,粒徑約0.3-5μm;2eds分析結(jié)果:a、b、c組表面元素均為ti;d、e、f、g、h組:表面元素均為c、o、p、ca、ti,其中ca的原子百分比分別為3.41%、4.62%、9.73%、6.28%、6.81%,p的原子百分比分別為2.33%、2.82%、6.24%、4.12%、4.97%,ca/p比分別為1.46、1.64、1.56、1.52、1.37;3nanomeasure1.2測量結(jié)果:b組鈦片表面微孔孔徑:平均孔徑1.28μm,0.5-3μm微孔所占比例為81%;d組、e組、g組、h組:表面礦化沉積物平均粒徑分別為1.55μm、0.98μm、1.68μm、2.42μm;f組:表面微球平均粒徑1.19μm;微球表面納米粒子平均長度210nm,寬度40nm,形成平均孔徑110nm的多孔孔隙結(jié)構(gòu);4表面粗糙度測量結(jié)果:b組a組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);a組、c組、e組、g組相比,e組g組a組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);c組a組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;b組、d組、f組、h組相比,f組d組b組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),f組h組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分純鈦表面生物礦化處理對(duì)前成骨細(xì)胞增殖分化的影響目的:成骨細(xì)胞在種植體表面的黏附、增殖和分化是骨結(jié)合形成的關(guān)鍵。通過機(jī)械、化學(xué)、生物等表面改性技術(shù)可有效改善材料與細(xì)胞的相容性,從而影響成骨細(xì)胞的生物學(xué)行為。從仿生學(xué)角度來講,微納米級(jí)的ha可顯著增加成骨細(xì)胞的粘附、增殖、alp活性和鈣磷沉積,通過生物礦化手段,制備具有微納米復(fù)合形貌的鈦表面可能更有利于細(xì)胞的功能表達(dá)。本部分實(shí)驗(yàn)通過直接熒光染色、mtt法、alp活性檢測評(píng)價(jià)mc3t3-e1細(xì)胞在各組鈦片表面黏附、增殖和分化功能的差異,從細(xì)胞水平揭示成骨細(xì)胞在不同表面處理鈦片的附著機(jī)理及功能性分化機(jī)制。方法:1鈦片分組及制備:a組:機(jī)械加工組;b組:噴砂酸蝕組;c組:噴砂酸蝕+sbf7天組;d組:噴砂酸蝕+sbf14天組;e組:噴砂酸蝕+cgf組,表面處理方法同第一部分。2mc3t3-e1細(xì)胞的礦化誘導(dǎo)及礦化結(jié)節(jié)的鑒定使用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)mc3t3-e1細(xì)胞進(jìn)行礦化誘導(dǎo),硝酸銀染色和茜素紅染色鑒定鈣結(jié)節(jié),alp染色評(píng)價(jià)alp活性。3采用直接熒光染色、mtt法、alp活性檢測評(píng)價(jià)mc3t3-e1細(xì)胞在各組鈦片表面黏附、增殖和分化功能的差異。結(jié)果:1mc3t3-e1細(xì)胞的礦化誘導(dǎo)及成骨分化活性的鑒定:礦化誘導(dǎo)14天時(shí)茜素紅染色、硝酸銀染色和alp染色結(jié)果均為陽性;2細(xì)胞在鈦片表面的伸展情況:接種后48h,a組鈦片表面細(xì)胞呈板狀伸展鋪開,細(xì)胞大而扁平呈多角形,f-actin遍布細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。b組、c組、d組和e組鈦片表面細(xì)胞f-actin束狀相互交錯(cuò),排列欠規(guī)整,細(xì)胞間突觸廣泛連接。其中d組鈦片表面細(xì)胞伸出更多毛刺狀突起和更長的偽足;3mtt檢測結(jié)果:培養(yǎng)1d時(shí),od值d組a組、b組和c組,e組a組、b組和c組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。d組e組,c組b組a組,但兩兩比較差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。培養(yǎng)3d、5d和7d時(shí),d組e組c組b組a組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);4alp活性檢測結(jié)果:隨培養(yǎng)時(shí)間的延長,五組alp的比活力逐漸升高:培養(yǎng)4d時(shí),d組b組a組,d組c組和e組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),e組c組,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;培養(yǎng)7d和14d時(shí),d組e組c組b組a組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。第三部分純鈦表面生物礦化處理對(duì)前成骨細(xì)胞的基因表達(dá)譜差異分析目的:基因芯片是以基因序列為分析對(duì)象,以基因探針和雜交測序技術(shù)為基礎(chǔ)的一種高效快速的核酸序列分析技術(shù),全基因組mrna表達(dá)芯片可同時(shí)檢測樣本幾乎所有已知基因的轉(zhuǎn)錄水平,有利于篩選出變化明顯的差異基因。小鼠前成骨細(xì)胞mc3t3-e1細(xì)胞是研究骨形成機(jī)制的經(jīng)典細(xì)胞,在第二部分的研究中,我們建立了可靠且可重復(fù)的mc3t3-e1體外誘導(dǎo)成骨模型,本部分實(shí)驗(yàn)通過全基因表達(dá)譜差異分析技術(shù)檢測差異表達(dá)基因及相關(guān)的信號(hào)通路,從基因水平探討純鈦不同表面形貌對(duì)成骨細(xì)胞骨改建的分子生物學(xué)機(jī)制。方法:1鈦片分組及制備同第二部分。2trizol法提取總rna:于mc3t3-e1細(xì)胞礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)后7d、14d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集鈦片表面細(xì)胞,提取總rna,并測定其濃度、純度和完整性。3全基因組mrna表達(dá)譜芯片的制備。4基因芯片的掃描和數(shù)據(jù)分析使用transcriptomeanalysisconsole_3_0軟件掃描分析數(shù)據(jù),篩選出上調(diào)或下調(diào)兩倍以上的基因,使用pathway分析篩選差異基因及相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。結(jié)果:1總rna純度、完整性檢測:各組樣本rna純度、濃度和完整性均符合實(shí)驗(yàn)要求;2表達(dá)譜芯片檢測分析結(jié)果:2.1b組與a組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共4027個(gè)(2255個(gè)上調(diào),1772個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共2934個(gè)(1599個(gè)上調(diào),1335個(gè)下調(diào)),在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)tgfbr1基因的上調(diào);2.2c組與a組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共4087個(gè)(2202個(gè)上調(diào),1885個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共3135個(gè)(1956個(gè)上調(diào),1179個(gè)下調(diào)),在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)上調(diào)的基因有:araf、sipa1、map2k7、rasa3、thbs1、apc和lrp1;2.3d組與a組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共4540個(gè)(2550個(gè)上調(diào),1990個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共3043個(gè)(1745個(gè)上調(diào),1298個(gè)下調(diào)),bmp4明顯上調(diào)。在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)上調(diào)的基因有:prkcd、sipa1和ski;2.4e組與a組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共4073個(gè)(2416個(gè)上調(diào),1657個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共篩選出3535個(gè)(2448個(gè)上調(diào),1087個(gè)下調(diào)),runx2基因明顯上調(diào)。在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)上調(diào)的基因有smad3和sipa1;2.5d組與c組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共912個(gè)(461個(gè)上調(diào),451個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共668個(gè)(332個(gè)上調(diào),336個(gè)下調(diào)),在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)上調(diào)的基因有:bmp4和foxh1;2.6e組與c組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共2127個(gè)(1277個(gè)上調(diào),850個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共387個(gè)(285個(gè)上調(diào),102個(gè)下調(diào)),兩個(gè)時(shí)間段與成骨相關(guān)的基因未見重疊。調(diào)整差異倍數(shù)為1.5倍時(shí),兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)上調(diào)的成骨相關(guān)基因有jun和inhba;2.7d組與e組相比,礦化誘導(dǎo)7天時(shí),2倍以上差異基因共1487個(gè)(716個(gè)上調(diào),771個(gè)下調(diào));14天時(shí),2倍以上差異基因共826個(gè)(329個(gè)上調(diào),497個(gè)下調(diào)),在兩個(gè)時(shí)間段均出現(xiàn)bmp4的上調(diào);3差異基因pathway分析:差異基因主要涉及了20條途徑,其中與成骨分化關(guān)系密切的有wnt信號(hào)通路、mapk信號(hào)通路和tgf-β信號(hào)通路。第四部分純鈦種植體表面生物礦化處理對(duì)骨結(jié)合的影響目的:種植體表面生物礦化處理可以改變種植體與骨組織的結(jié)合方式,提高界面結(jié)合強(qiáng)度,加速骨結(jié)合進(jìn)程,縮短種植修復(fù)的愈合期,具有良好的生物活性。本部分研究建立了成年beagle犬人工種植牙動(dòng)物模型,采用金屬-骨組織聯(lián)合磨片技術(shù)觀察種植體與骨組織的結(jié)合,分析評(píng)價(jià)生物礦化種植體表面促進(jìn)骨結(jié)合、增加骨結(jié)合力的機(jī)制,為設(shè)計(jì)具有優(yōu)良表面形貌結(jié)構(gòu)的人工牙種植體、提高人工種植牙的成功率提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:成年健康雄性beagle犬15只。2種植體分組及制備埋置式純鈦螺紋種植體,直徑3.5mm,長度8mm,分為5組,每組18枚,共90枚,種植體的表面處理方法同第二部分鈦片表面處理。3beagle犬拔牙后延期種植動(dòng)物模型的建立全麻下拔除beagle犬下頜第一、二、三、四前磨牙,三個(gè)月后將90顆種植體植入beagle犬雙側(cè)下頜骨內(nèi)。4標(biāo)本留取與處理分別于術(shù)后4、8、12周處死動(dòng)物,進(jìn)行大體觀察并拍攝x線片以觀察骨愈合情況。一半標(biāo)本隨即進(jìn)行旋出扭力測試,另一半標(biāo)本固定后制備硬組織切片。5組織學(xué)觀察和骨計(jì)量學(xué)在熒光顯微鏡下觀察并測量計(jì)算骨礦化沉積率;硬組織切片染色后顯微鏡觀察界面成骨情況,測量并計(jì)算骨結(jié)合指數(shù)和種植體周圍骨鈣化面積百分率,將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:1種植術(shù)后x線觀察:術(shù)后4w、8w、12w時(shí),x線片和cbct觀察種植體周圍均未見異常透射影像,頸部垂直骨吸收均小于2mm;2雙熒光標(biāo)記結(jié)果:術(shù)后4w,種植體周圍可見散在黃、綠色熒光,a組和b組黃色熒光主要集中在種植窩壁上、c組、d組和e組在種植體表面和周圍窩壁均可見黃色熒光;術(shù)后8w,熒光顯色的范圍和數(shù)量較4w時(shí)明顯增加,黃色熒光呈片狀、綠色熒光呈線狀分布,與種植體相接觸,并沿種植窩壁向螺紋內(nèi)部生長,c組、d組和e組螺紋凹槽底部見有部分熒光分布;術(shù)后12w,a組、b組熒光條帶主要集中在周圍骨創(chuàng)區(qū),種植體表面較少。c組、d組和e組種植體表面和相應(yīng)的骨表面均有黃色熒光條帶,并有綠色條帶將其連接在一起;3硬組織切片組織學(xué)觀察:術(shù)后4周,種植體螺紋間充滿稀疏新生編織骨,自備洞骨緣向螺紋斜面爬行生長。和a組、b組相比,c組、d組和e組種植體骨小梁量較多,排列較為致密;術(shù)后8周,種植體周圍新生骨量較4周時(shí)明顯增加,新生骨沿螺紋斜面爬行至螺紋底部,新生骨小梁骨髓腔變小;術(shù)后12周,新生骨排列致密有序,形成板層結(jié)構(gòu),a組和b組種植體-骨的接觸主要集中在種植體螺紋頂端和斜壁,c組、d組和e組種植體-骨的接觸主要集中在螺紋底部凹槽,接觸成骨現(xiàn)象更加明顯;4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果:4.1種植體旋出扭力峰值,術(shù)后4w時(shí),d組e組c組b組a組,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);術(shù)后8w時(shí),扭力峰值d組e組c組b組a組,b組a組,d組e組c組,除c組b組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余各組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);術(shù)后12w時(shí),扭力峰值d組c組b組a組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),d組e組,e組c組,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;4.2礦化沉積率(mar)4w、12w時(shí),d組e組c組b組a組,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);術(shù)后8w時(shí),d組e組c組b組a組,e組和c組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,其余各組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);4.3骨結(jié)合指數(shù)(oi%):術(shù)后4w和8w時(shí),d組e組c組b組a組,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);術(shù)后12w時(shí),d組e組c組b組a組,除e組和c組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余各組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);4.4種植體周圍骨鈣化面積百分率(ca%):術(shù)后4w時(shí),d組e組c組b組a組,除e組和c組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外,其余各組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);術(shù)后8w和12w時(shí),d組e組c組b組a組,各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:1純鈦表面不同基礎(chǔ)處理對(duì)生物礦化效果有影響,經(jīng)噴砂酸蝕表面基礎(chǔ)處理可獲得微納米多級(jí)孔洞結(jié)構(gòu),有利于生物礦化形成。2礦化時(shí)間對(duì)礦化效果有影響,sbf2周礦化處理礦化質(zhì)量優(yōu)于1周礦化處理。3cgf纖維蛋白液礦化處理效果優(yōu)于sbf生物礦化液。4小鼠前成骨細(xì)胞mc3t3-e1體外礦化誘導(dǎo)14天即可出現(xiàn)礦化成骨,是體外研究生物材料對(duì)細(xì)胞黏附、增殖功能影響的可靠細(xì)胞。5純鈦表面處理形成不同的形貌結(jié)構(gòu),可影響mc3t3-e1細(xì)胞的黏附伸展、增殖和分化。6純鈦表面經(jīng)cgf纖維蛋白液、sbf礦化處理有利于mc3t3-e1細(xì)胞的黏附伸展、增殖和分化。7純鈦表面不同處理可導(dǎo)致mc3t3-e1細(xì)胞基因表達(dá)差異,通過基因表達(dá)差異分析可推斷不同表面處理通過不同的信號(hào)通路影響細(xì)胞的黏附、增殖、分化和成骨。8噴砂酸蝕處理可上調(diào)tgfbr1基因,推測其促進(jìn)mc3t3-e1細(xì)胞成骨分化可能與tgf-β信號(hào)通路有關(guān)。9sbf生物礦化處理可上調(diào)map2k7、bmp4基因,推測sbf生物礦化可能通過wnt、mapk和tgf-β信號(hào)通路促進(jìn)mc3t3-e1細(xì)胞增殖、成骨分化。10cgf生物礦化處理可上調(diào)runx2、smad3基因,推測cgf生物礦化可能通過MAPK、TGF-β信號(hào)通路促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞增殖、成骨分化。11純鈦種植體表面經(jīng)不同方法處理形成不同的形貌結(jié)構(gòu),對(duì)種植體骨結(jié)合形成方式有影響。12單純機(jī)械加工種植體的骨結(jié)合形成方式主要為距離成骨;經(jīng)噴砂酸蝕處理純鈦種植體表面有部分接觸成骨;生物礦化處理純鈦種植體表面的成骨方式均為雙向成骨。13 SBF礦化處理2周種植體新骨形成量最多,CGF礦化處理1周次之,SBF礦化處理1周、噴砂酸蝕處理、機(jī)械加工處理純鈦種植體新骨形成量依次減少。
【關(guān)鍵詞】：生物礦化 SBF 富自體濃縮生長因子 MC3T3-E1前成骨細(xì)胞 基因芯片
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R783.6
【目錄】：

• 中文摘要5-13
• 英文摘要13-25
• 英文縮寫25-27
• 引言27-29
• 第一部分 純鈦表面生物礦化處理工藝29-70
• 前言29-31
• 材料與方法31-36
• 結(jié)果36-39
• 附圖39-59
• 附表59-60
• 討論60-65
• 小結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 第二部分 純鈦表面生物礦化處理對(duì)前成骨細(xì)胞增殖分化的影響70-99
• 前言70-71
• 材料與方法71-78
• 結(jié)果78-80
• 附圖80-90
• 附表90-91
• 討論91-95
• 小結(jié)95-96
• 參考文獻(xiàn)96-99
• 第三部分 純鈦表面生物礦化處理對(duì)前成骨細(xì)胞的基因表達(dá)譜差異分析99-148
• 前言99-100
• 材料與方法100-108
• 結(jié)果108-111
• 附圖111-126
• 附表126-139
• 討論139-144
• 小結(jié)144-145
• 參考文獻(xiàn)145-148
• 第四部分 純鈦種植體表面生物礦化處理對(duì)骨結(jié)合的影響148-187
• 前言148-149
• 材料與方法149-155
• 結(jié)果155-159
• 附圖159-177
• 附表177-179
• 討論179-183
• 小結(jié)183-184
• 參考文獻(xiàn)184-187
• 結(jié)論187-189
• 綜述一 純鈦種植體表面生物礦化處理的研究進(jìn)展189-201
• 參考文獻(xiàn)197-201
• 綜述二 純鈦種植體表面不同處理對(duì)骨結(jié)合的影響201-215
• 參考文獻(xiàn)210-215
• 致謝215-216
• 個(gè)人簡歷216

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本文編號(hào)：664253