本文關(guān)鍵詞：Noggin及BMP2基因?qū)DSCs和BMSCs成骨分化能力的影響及比較研究

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【摘要】：目的： 本實(shí)驗(yàn)嘗試在體外環(huán)境下下調(diào)細(xì)胞中Noggin基因和增加BMP2基因，觀察對(duì)脂肪干細(xì)胞(ADSCs)和骨髓干細(xì)胞(BMSCs)成骨分化能力的影響及兩種干細(xì)胞成骨分化能力的比較。 方法： 使用脂質(zhì)體將NogginshRNA和BMP2基因共同轉(zhuǎn)染取自同一只SD大鼠的BMSCs和ADSCs中，并進(jìn)行成骨誘導(dǎo)。分別在3、7、14天三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，采用Realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)成骨相關(guān)基因的表達(dá)，并通過(guò)茜素紅染色法檢測(cè)其成骨分化能力。 結(jié)果： 1. ADSCs和BMSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯示：成功從同一只SD大鼠中取得ADSCs和BMSCs，并觀察其成骨、成脂誘導(dǎo)后茜素紅染色和油紅O染色。 2. Realtime-PCR結(jié)果顯示：3、7、14天ADSCs及BMSCsBMP2基因的表達(dá)趨勢(shì)相同，BMP2組BMP2基因的表達(dá)明顯高于EGFP組（對(duì)照組）（P0.01），而BMP2+NogginshRNA組BMP2基因的表達(dá)明顯高于BMP2組（P0.01）。 3. Realtime-PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染3、7、14天后ADSCs實(shí)驗(yàn)組（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表達(dá)與對(duì)照組（EGFP）相比均顯著升高（P0.01）。而BMP2+NogginshRNA組Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表達(dá)與BMP2組相比均顯著升高（P0.01）。同樣地，轉(zhuǎn)染3、7、14天后BMSCs實(shí)驗(yàn)組（BMP2、BMP2+NogginshRNA）Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表達(dá)與對(duì)照組（EGFP）相比顯著升高（P0.05）。而BMP2+NogginshRNA組Runx2、Col1、ALP、Sp7成骨基因的表達(dá)與BMP2組相比顯著升高（P0.05）。 4.茜素紅染色結(jié)果顯示：EGFP組、BMP2組、BMP2+NogginshRNA組鈣結(jié)節(jié)量明顯呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)。定量分析結(jié)果顯示呈遞增趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。BMSCs形成的鈣結(jié)節(jié)明顯大于ADSCs，，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。 5.Realtime-PCR結(jié)果顯示：BMP2基因和Noggin基因沉默共同修飾后BMSCs成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表達(dá)與同等條件下的ADSCs相比均顯著上調(diào)（P0.01）。BMP2基因和Noggin基因沉默共同修飾后的ADSCs3、7、14天BMP2基因的表達(dá)與對(duì)照組（EGFP組）的BMSCs相比均顯著上調(diào)（P0.01），而成骨基因Runx2、Col1、ALP、Sp7的表達(dá)卻顯著下調(diào)（P0.01）。 結(jié)論: 1.BMP2基因及NogginshRNA共同作用的干細(xì)胞BMP2的表達(dá)及成骨分化能力優(yōu)于BMP2單基因作用的干細(xì)胞； 2.BMP2基因及NogginshRNA修飾下BMSCs的成骨能力優(yōu)于ADSCs； 3.不經(jīng)基因修飾的BMSCs成骨能力優(yōu)于BMP2基因及NogginshRNA修飾的ADSCs。
【關(guān)鍵詞】：脂肪干細(xì)胞 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 BMP2 Noggin 成骨分化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R78
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目錄8-10
• 縮略詞表10-12
• 第1章 引言12-19
• 1.1 前言12-13
• 1.2 文獻(xiàn)綜述13-19
• 1.2.1 干細(xì)胞在骨組織工程中的應(yīng)用13-16
• 1.2.2 關(guān)于成骨分化的信號(hào)通路16-17
• 1.2.3 BMP信號(hào)通路及其拮抗劑在骨組織工程中的研究進(jìn)展17-18
• 1.2.4 本實(shí)驗(yàn)的研究目的18-19
• 第2章 正文19-36
• 2.1 材料與方法19-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物19
• 2.1.2 主要材料與試劑19-20
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備20
• 2.1.4 試劑配制20-21
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 2.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-33
• 2.2.1 ADSCs和BMSCs細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察26-27
• 2.2.2 ADSCs和BMSCs成骨、成脂誘導(dǎo)分化27-28
• 2.2.3 EGFP的表達(dá)28
• 2.2.4 Noggin基因沉默的表達(dá)28-29
• 2.2.5 BMP2基因和Noggin基因沉默對(duì)ADSCs和BMSCs成骨分化的影響29-31
• 2.2.6 ADSCs與BMSCs成骨能力的比較31-33
• 2.3 討論33-36
• 第3章 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-44
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果44-45
• 致謝45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：660833