本文關(guān)鍵詞：骨形成蛋白2調(diào)控成牙骨質(zhì)細(xì)胞中sclerostin表達(dá)變化的初步研究

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【摘要】：隨著大眾對生活品質(zhì)的要求漸漸提高,越來越多的錯頜畸形患者開始尋求牙齒正畸治療,在正畸治療改善患者笑容,改正牙齒咬合狀況的同時,其副作用也逐漸引起人們的重視,正畸治療導(dǎo)致的炎性牙根吸收(Orthodontically induced inflammatory root resorption, OIIRR)就是其中之一。越來越多的正畸學(xué)者開始研究預(yù)防及治療OIIRR的有效方法。眾所周知,成牙骨質(zhì)細(xì)胞參與了牙根形成、牙周組織再生和牙根吸收的修復(fù),所以成牙骨質(zhì)細(xì)胞成為眾多正畸力學(xué)研究的對象之一。骨形成蛋白2 (Bone morphogenetic protein2, BMP2)是一種骨形成誘導(dǎo)劑,在牙根發(fā)育中起著重要作用。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn),分化成熟的成牙骨質(zhì)細(xì)胞表達(dá)BMP2,在機(jī)械應(yīng)力的調(diào)控下,BMP2信號得到增強(qiáng),同時Smadl/5/8蛋白的表達(dá)也出現(xiàn)變化,提示BMP2/Smads信號通路可能參與了應(yīng)力刺激對成牙骨質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)控。骨硬化蛋白Sclerostin (SOST)是硬化性骨化癥(sclerosteosis)基因編碼表達(dá)的一種分泌型糖蛋白,是一種骨形成抑制劑,特別是可抑制BMP誘導(dǎo)的骨形成。但是BMP2能否調(diào)控SOST的表達(dá)還不明確。本課題通過增強(qiáng)BMP2信號,探討成牙骨質(zhì)細(xì)胞中BMP2對sclerostin的表達(dá)的調(diào)控作用,并且初步探索哪些BMP相關(guān)通路參與了BMP2的這種調(diào)控作用。實驗分為三個部分：1.不同濃度BMP2對OCCM30內(nèi)sclerostin表達(dá)的影響目的：探索不同濃度BMP2對OCCM30內(nèi)sclerostin (SOST)表達(dá)的影響。方法：應(yīng)用含有BMP2濃度分別為Ong/ml,50ng/ml,100ng/ml的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞3d、5d、 7d, RT-PCR檢測SOSTmRNA水平,Western blot檢測sclerostin蛋白水平。結(jié)果：RT-PCR以及Western blot結(jié)果均顯示,BMP2可以上調(diào)SOST的表達(dá),且具有濃度依賴性。隨著時間的增加,SOST表達(dá)隨之增強(qiáng)。結(jié)論：在OCCM-30中BMP2正向調(diào)控SOST表達(dá),且隨著BMP2孵育時間的增加,SOST表達(dá)也隨之增強(qiáng)。2.不同濃度dorsomorphin, PD98059, SB202190對OCCM30增殖的影響目的：探索不同濃度dorsomorphin, PD98059, SB202190對OCCM30增殖的影響,為后續(xù)實驗篩選最佳阻斷劑濃度。方法：應(yīng)用含不同濃度dorsomorphin, PD98059, SB202190的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM30,濃度梯度均設(shè)置為2μM、4μM、 CCK檢測細(xì)胞增殖。結(jié)果：各個濃度的dorsomorphin對OCCM30的增殖均表現(xiàn)出抑制,dorsomorphin濃度越高抑制作用越明顯。各個濃度的SB202190以及PD98059對OCCM30的增殖在24h、48h未表現(xiàn)出明顯抑制,而在72h表現(xiàn)出不同程度的抑制作用,且阻斷劑濃度越高,抑制作用越明顯。3.BMP2相關(guān)通路對成牙骨質(zhì)細(xì)胞中SOST表達(dá)變化的影響目的：探索BMP2相關(guān)通路(Smad通路／MAPK通路/ERK1/2通路)對成牙骨質(zhì)細(xì)胞中SOST表達(dá)變化的影響。方法：將實驗分為A、B、C、D、E五組,A組為空白對照,不加BMP2不加阻斷劑;B組加BMP2；C組加BMP2+dorsomorphin;D組加BMP2+SB202190,E組加BMP2+PD98059,分別于第3d、5d收樣進(jìn)行檢測,RT-PCR檢測各組SOSTmRNA表達(dá), Western Blot檢測sclerostin表達(dá)。結(jié)果：相對于BMP2組,BMP2+2μMdorsomorphin組、BMP2+10μM SB202190組以及BMP2+10μM PD98059組sclerostin水平均降低,BMP2+2μMdorsomorphin組降低最多。結(jié)論：無論是阻斷BMP/Smad通路、P38MAPK通路還是ERK1/2通路,sclerostin的表達(dá)均會受到抑制,阻斷BMP/Smad信號通路后sclerostin表達(dá)降低程度更大。提示BMP2對OCCM30細(xì)胞中sclerostin (SOST)表達(dá)的上調(diào)作用主要由BMP/Smad信號通路介導(dǎo)。
【關(guān)鍵詞】：BMP2/smads SOST Sclerostin OCCM30 dorsomorphin
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R783.5
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 實驗一 不同濃度BMP2對OCCM30內(nèi)sclerostin表達(dá)的影響14-23
• 1. 材料14-15
• 2. 方法15-19
• 3. 結(jié)果19-21
• 4. 討論21-23
• 實驗二 不同濃度dorsomorphin,SB202190,PD98059對OCCM30增殖的影響23-31
• 1. 材料23-24
• 2. 方法24-26
• 3. 結(jié)果26-29
• 4. 討論29-31
• 實驗三 BMP2相關(guān)通路對成牙骨質(zhì)細(xì)胞中SOST表達(dá)變化的影響31-38
• 1. 材料31
• 2. 方法31-32
• 3. 結(jié)果32-35
• 4. 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 碩士期間發(fā)表論文55

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本文編號：626489