發(fā)布時(shí)間：2017-08-05 11:10

  本文關(guān)鍵詞：利用PFKFB3的生物節(jié)律性有效抑制舌癌進(jìn)程的調(diào)控機(jī)制

  更多相關(guān)文章： PFKFB3 生物鐘紊亂 舌癌 CLOCK Bmall 3PO 時(shí)間療法

【摘要】：1.研究背景與目的 生物節(jié)律性對(duì)生物體的行為學(xué)和生理學(xué)的調(diào)控起著至關(guān)重要的作用,越來(lái)越多的證據(jù)已經(jīng)證實(shí),生物節(jié)律性紊亂可以提高致癌風(fēng)險(xiǎn)。輪班制工作,飛行時(shí)差反應(yīng),夜間光污染等均被列為引起生物節(jié)律性紊亂的因素。此外,生物節(jié)律性是否正常也可以作為一個(gè)獨(dú)立影響因子,對(duì)癌癥患者的預(yù)后具有預(yù)測(cè)性�；谏鲜鲆罁�(jù),有學(xué)者提出時(shí)間療法這一概念。由于癌癥細(xì)胞與正常體細(xì)胞表現(xiàn)出不同的生物節(jié)律性,所以時(shí)間療法即是利用這種差異,而給癌癥患者安排藥物或物理治療時(shí)間的方法。而這一療法在癌癥綜合治療及個(gè)性化治療中具有較好的應(yīng)用前景已被眾多研究證實(shí)。然而,生物鐘紊亂對(duì)口腔相關(guān)疾病影響的研究尚較少。 近年來(lái),PFKFB3及其產(chǎn)物iPFK2備受關(guān)注,因?yàn)槠浔蛔C實(shí)為PFKFB家族中作用最強(qiáng)的激酶。iPFK2可以通過(guò)促進(jìn)PFK1,這一糖酵解限速酶的功能,從而大大提高糖酵解反應(yīng)的速率。而早在1927年,學(xué)者Otto Warburg即研究證實(shí),即使在供氧充足的條件下,癌癥細(xì)胞生物代謝所需能量的80%仍來(lái)源于無(wú)氧代謝——糖酵解過(guò)程,此經(jīng)典供能模式被稱(chēng)為"Warburg效應(yīng)”。同時(shí),大量臨床證據(jù)已證實(shí),PFKFB3在眾多癌癥組織中都呈現(xiàn)出高表達(dá)。針對(duì)PFKFB3研發(fā)出的小分子抑制劑3PO已被作為單一靶向治療藥物正式進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段�？梢�(jiàn),PFKFB3在癌癥細(xì)胞能量代謝中扮演著極其重要的角色。 然而,目前為止,并無(wú)相關(guān)研究探究生物節(jié)律性的紊亂或者PFKFB3本身的生物節(jié)律性是否會(huì)影響癌癥的發(fā)生和發(fā)展。如果能夠找出PFKFB3的生物節(jié)律性與口腔癌癥之間的相互作用,并PFKFB3為藥物靶點(diǎn),將時(shí)間療法應(yīng)用于口腔癌癥的治療中,無(wú)疑是為口腔癌癥的綜合治療及個(gè)性化治療提供了一個(gè)全新的思路。 2.研究材料與方法 (1)將購(gòu)買(mǎi)獲得的人舌癌細(xì)胞系SCC9增殖培養(yǎng)后,采用血清饑餓處理的方法同步化,分6個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別收集細(xì)胞,裂解后提取細(xì)胞的RNA,采用RT-PCR的方法探索該細(xì)胞PFKFB3, CLOCK, Bmal1, Per1以及Per2的生物節(jié)律性： (2)采用基因測(cè)序的方法獲得PFKFB3啟動(dòng)子全序列,并利用軟件定位出啟動(dòng)子上所有E-boxes的位置：利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和熒光素酶報(bào)告檢測(cè)技術(shù)證實(shí)CLOCK、Bmal1及其復(fù)合物對(duì)PFKFB3表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,及在不同時(shí)間點(diǎn)下PFKFB3的表達(dá)差異； (3)以SCC9為細(xì)胞模型,以3PO為PFKFB3的靶向抑制劑,利用RT-PCR.細(xì)胞流式等技術(shù),體外證實(shí)不同時(shí)間點(diǎn)下,3PO抑制PFKFB3表達(dá)的能力是否有所差異,以及時(shí)間療法對(duì)細(xì)胞生物行為的影響。 3.研究結(jié)果 (1) PFKFB3基因在舌癌細(xì)胞中表達(dá)具有明顯的生物節(jié)律性,具有早晨表達(dá)被促進(jìn),夜間表達(dá)被抑制的規(guī)律。生物鐘核心正反饋基因CLOCK在舌癌細(xì)胞表達(dá)的生物節(jié)律性與PFKFB3基因極其相似；而生物鐘核心正反饋基因Bmal1表達(dá)紊亂,持續(xù)被抑制在極低水平；生物鐘核心負(fù)反饋基因Per1及Per2在舌癌細(xì)胞中表達(dá)的生物節(jié)律性具有雙高峰; (2) PFKFB3啟動(dòng)子上有33個(gè)E-box,其中包括一個(gè)嚴(yán)格的Bmal1/CLOCK復(fù)合體結(jié)合位點(diǎn)(CACGTGA),同時(shí)證實(shí),CLOCK/Bmal1復(fù)合體對(duì)PFKFB3轉(zhuǎn)錄翻譯的調(diào)控規(guī)律為：增加CLOCK的表達(dá),可顯著提高PFKFB3基因的轉(zhuǎn)錄水平：而這種作用會(huì)被Bmal1抑制;將CLOCK變異后,PFKFB3基因的表達(dá)幾乎接近正常細(xì)胞水平；因此PFKFB3基因的節(jié)律性表達(dá)中,CLOCK起的作用更為關(guān)鍵； (3)體外不同時(shí)間點(diǎn)給予舌癌細(xì)胞PFKFB3抑制劑3PO刺激,ZT7時(shí)癌細(xì)胞的增殖能力可被顯著抑制,凋亡能力可被顯著促進(jìn);而ZT19這一時(shí)間點(diǎn)下,藥物效果無(wú)顯著差異；同時(shí),在兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)下,PFKFB3抑制劑3PO對(duì)舌癌細(xì)胞的細(xì)胞周期均無(wú)明顯的影響。 4.研究結(jié)論 本研究首次從細(xì)胞的基因水平證實(shí),PFKFB3在舌癌細(xì)胞中不僅表達(dá)量增高,而且具有生物節(jié)律性,這一生物節(jié)律性極有可能受到CLOCK/Bmal1復(fù)合體的直接調(diào)控,其中CLOCK可能占有更為主導(dǎo)的優(yōu)勢(shì)。同時(shí),本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了這一結(jié)論,并證實(shí)ZT7時(shí)間點(diǎn)下應(yīng)用抗癌藥物3PO,更有助于抑制細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,從而將抗癌藥效最大化,為時(shí)間治療在口腔癌癥治療中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：PFKFB3 生物鐘紊亂 舌癌 CLOCK Bmall 3PO 時(shí)間療法
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.86
【目錄】：

• 縮略詞表7-9
• 中文摘要9-13
• Abstract13-17
• 引言17-22
• 參考文獻(xiàn)20-22
• 第一部分 舌癌細(xì)胞中PFKFB3及核心生物鐘基因生物節(jié)律性的檢測(cè)22-42
• 1. 材料23-24
• 2. 方法24-29
• 3. 結(jié)果29-32
• 4. 討論32-34
• 5. 小結(jié)34
• 參考文獻(xiàn)34-42
• 第二部分 生物鐘核心基因CLOCK/Bmal1對(duì)PFKFB3轉(zhuǎn)錄翻譯的調(diào)控及其機(jī)制42-60
• 1. 材料43-45
• 2. 方法45-52
• 3. 結(jié)果52-55
• 4. 討論55-56
• 5. 小結(jié)56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 第三部分 體外探查利用PFKFB3的生物節(jié)律性有效抑制舌癌進(jìn)程的機(jī)制60-75
• 1. 材料61-62
• 2. 方法62-65
• 3. 結(jié)果65-71
• 4. 討論71-72
• 5. 小結(jié)72
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 全文結(jié)論75-77
• 綜述77-95
• 參考文獻(xiàn)84-95
• 附件95-102
• 致謝102-104

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 Arthur T.Winfree;方能御;;人體鐘與睡眠節(jié)律[J];世界科學(xué);1982年09期

2 李振彬;;“中國(guó)鐘”的節(jié)律全息研究——《內(nèi)經(jīng)》的近似節(jié)律全息現(xiàn)象和人體自然節(jié)律全息假說(shuō)的提出[J];遼寧中醫(yī)雜志;1988年08期

3 尹淑嬡;;生理誘導(dǎo)對(duì)雄麝泌香節(jié)律的影響[J];四川生理科學(xué)雜志;1989年03期

4 李勤;節(jié)律、時(shí)間生理學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)[J];菏澤醫(yī)專(zhuān)學(xué)報(bào);1990年01期

5 黃宏華;;也論月經(jīng)節(jié)律與月亮的關(guān)系[J];湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

6 周仕明;趙菊秋;;中醫(yī)人氣節(jié)律[J];山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1991年03期

7 胡劍北;;中醫(yī)時(shí)辰醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代時(shí)間醫(yī)學(xué)研究的聯(lián)系與區(qū)別[J];大自然探索;1989年02期

8 薛謂三;;奇妙的人體“七節(jié)律”[J];科學(xué)之友;1996年12期

9 李振彬;;“中國(guó)鐘”的節(jié)律全息研究——對(duì)人體自然節(jié)律全息現(xiàn)象形成原理的研究設(shè)想[J];遼寧中醫(yī)雜志;1989年07期

10 趙付芝;楊偉;;305例肺癌死亡節(jié)律的探討[J];山東中醫(yī)雜志;1992年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 李曉光;;《內(nèi)經(jīng)》有關(guān)生命節(jié)律研究綜述[A];2009全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 張玲;;藥物應(yīng)用的時(shí)間與節(jié)律[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第九屆中醫(yī)醫(yī)史文獻(xiàn)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集萃[C];2006年

3 劉宏陽(yáng);;試論真心痛證的病變節(jié)律——106例心梗病人發(fā)病時(shí)辰分析[A];全國(guó)冠心病防治及對(duì)策研討會(huì)論文集[C];1987年

4 馮秀杰;;調(diào)整睡眠節(jié)律在精神障礙中的應(yīng)用[A];2004全國(guó)時(shí)間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

5 王志芳;王穎;李虹;劉玉紅;黃祖春;謝正祥;;后發(fā)放節(jié)律還是視覺(jué)松弛波[A];節(jié)能環(huán)保 和諧發(fā)展——2007中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集（二）[C];2007年

6 張櫨;陳桂芬;林龍年;;Theta驅(qū)動(dòng)細(xì)胞調(diào)控海馬Theta節(jié)律(英文)[A];第一屆全國(guó)神經(jīng)動(dòng)力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議程序手冊(cè) & 論文摘要集[C];2012年

7 張達(dá)燕;褚峰;陶卉;束梅影;劉恒江;司馬楊虎;徐世清;;基于光節(jié)律誘導(dǎo)的家蠶孵化節(jié)律及分子機(jī)制研究[A];第十屆家（柞）蠶遺傳育種及良種繁育學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

8 劉杰;賈z嚴(yán)，

本文編號(hào)：624568