本文關(guān)鍵詞：載抗菌肽（KSL-W）微球的緩釋研究

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【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)選用已被前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)對(duì)引起種植體周圍炎的病原菌如具核梭桿菌和牙齦卟啉單胞菌等有明顯的抑制作用的人工合成抗菌肽(KSL-W),通過靜電紡絲技術(shù)和乳化交聯(lián)的方法將抗菌肽其載入PLGA與殼聚糖的復(fù)式微球中,檢測(cè)不同時(shí)期復(fù)式微球緩釋的抗菌肽濃度對(duì)具核梭桿菌的抑菌效果,為以后種植體周圍炎的相關(guān)研究提供理論依據(jù)。方法:1.載抗菌肽(KSL-W)的PLGA微球的制備依據(jù)(KSL-W)氨基酸的序列,人工合成此抗菌肽。本實(shí)驗(yàn)采用靜電紡絲的方法將抗菌肽(KSL-W)投放在PLGA微球中。2.雙重載抗菌肽(KSL-W)PLGA/殼聚糖復(fù)式微球的制備在第一步制備在抗菌肽(KSL-W)PLGA微球的基礎(chǔ)上,為了避免PLGA降解產(chǎn)酸會(huì)的破壞抗菌肽的穩(wěn)定性的問題,通化乳化交聯(lián)的方法將殼聚糖包裹在PLGA微球的外殼中即PLGA/殼聚糖復(fù)式微球,從而達(dá)到中和了降解產(chǎn)物的酸性微環(huán)境。3.微球的形貌及抗菌肽(KSL-W)在微球中的分布情況掃描電子顯微鏡來觀察微球的表面形態(tài),激光共聚焦顯微鏡觀察抗菌肽(KSL-W)在微球中的分布情況。4.微球的包埋率將乙腈溶液溶解定量微球PLGA和2%的醋酸溶液溶解定量PLGA/殼聚糖復(fù)式微球,然后紫外分光光度計(jì)測(cè)量抗菌肽(KSL-W)微球的載藥情況。5.載抗菌肽(KSL-W)的PLGA/殼聚糖復(fù)式微球在80天里緩釋抗菌肽的濃度曲線及累計(jì)曲線紫外分光光度計(jì)測(cè)量在固定時(shí)間點(diǎn)上緩釋出來上清液抗菌肽的濃度。6.載抗菌肽(KSL-W)PLGA/殼聚聚糖復(fù)式微球緩釋中的抗菌肽的分子量和二級(jí)結(jié)構(gòu)分析飛行時(shí)間質(zhì)譜儀及遠(yuǎn)紫外二色譜儀檢測(cè)第30天緩釋液中抗菌肽的相對(duì)分子質(zhì)量和二級(jí)結(jié)構(gòu)。7.復(fù)式微球的抑菌性能牛津杯法即瓊脂擴(kuò)散法來評(píng)價(jià)復(fù)式微球在緩釋的不同時(shí)期對(duì)具核梭桿菌的抑菌活力。8.微球的細(xì)胞活性評(píng)價(jià)通過MC3T3-E1細(xì)胞增殖情況來評(píng)價(jià)載抗菌肽(KSL-W)復(fù)式微球?qū)?xì)胞的影響。結(jié)果:電鏡圖片顯示PLGA微球具有光滑而又緊密的球形結(jié)構(gòu),PLGA/殼聚糖復(fù)式微球是具有皺褶的表面的球形結(jié)構(gòu)。激光共聚焦圖片顯示在PLGA微球和PLGA/殼聚糖復(fù)式微球中有較多抗菌肽(KSL-W)的分布,在PLGA/殼聚糖復(fù)式微球中可以看到所被殼聚糖包埋的PLGA微球。掃描電鏡的圖片也顯示了PLGA微球的平均粒徑約10μm左右,而激光粒度分析儀的結(jié)果顯示PLGA/殼聚糖復(fù)式微球的粒徑主要分布在10-100μm之間,平均粒徑主要集中于60-80μm。PLGA/殼聚糖復(fù)式微球中抗菌肽的包埋率在60-70%之間,而單純?cè)诳咕?KSL-W)PLGA微球的包埋率在93%左右。體外緩釋的結(jié)果顯示在緩釋的前10天里出現(xiàn)了微球的藥物突釋,并且可以看出在緩釋的80天,PLGA/殼聚糖復(fù)式微球依然緩慢的釋放抗菌肽(KSL-W)。通過飛行時(shí)間質(zhì)譜儀測(cè)出微球中抗菌肽相對(duì)分子質(zhì)量與原始抗菌肽一致,遠(yuǎn)紫外二色譜儀測(cè)出緩釋出來的抗菌肽(KSL-W)與原始抗菌肽(KSL-W)二級(jí)結(jié)構(gòu)的譜線相近。菌實(shí)驗(yàn)中可看出在緩釋的第10天可明顯觀察到抑菌環(huán),而對(duì)照組并沒有發(fā)現(xiàn)抑菌環(huán)。觀察第30天抑菌環(huán)大小與第10天的并沒有很明顯的差別。而在第50天,抑菌環(huán)明顯在減小,第80天時(shí)僅有一點(diǎn)點(diǎn)抑菌環(huán)存在。細(xì)胞活性評(píng)價(jià)顯示在微球在不同緩釋時(shí)期并沒用顯著的差異。結(jié)論:抗菌肽(KSL-W)可以投放在PLGA微球和PLGA/殼聚糖復(fù)式微球中;在整個(gè)復(fù)式微球制備、儲(chǔ)存和緩釋過程中抗菌肽活性未受影響;30天內(nèi)緩釋復(fù)式微球具有明顯抑菌效果。
【關(guān)鍵詞】：KSL-W 抗菌肽 微球 種植體周圍炎
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R783.6
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-18
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與器械13-14
• （一）主要實(shí)驗(yàn)材料13-14
• （二）主要實(shí)驗(yàn)器械14
• 二、實(shí)驗(yàn)方法14-18
• 1.載抗菌肽（KSL-W）PLGA 微球的制備14-15
• 2.制備載抗菌肽（KSL-W）PLGA/殼聚糖復(fù)式微球15
• 3.形貌分析15-16
• 4.微球的粒徑分析16
• 5.微球的包埋率16
• 6.體外釋放動(dòng)力學(xué)16
• 7.抗菌肽穩(wěn)定性的分析16-17
• 8.抑菌實(shí)驗(yàn)17
• 9.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)17-18
• 結(jié)果18-24
• 1.微球表面形態(tài)分析18
• 2.微球中抗菌肽（KSL-W）的分布情況18-19
• 3.微球的粒徑分布情況19
• 4.微球的平均粒徑及包埋率19-20
• 5.體外釋放實(shí)驗(yàn)20
• 6.微球中緩釋抗菌肽的累積釋放曲線20-21
• 7. 微球緩釋出的抗菌肽（KSL-W）的相對(duì)分子質(zhì)量分析21
• 8.微球緩釋出抗菌肽（KSL－W）二級(jí)結(jié)構(gòu)分析21-22
• 9.抑菌性能22
• 10.細(xì)胞活性評(píng)價(jià)22-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述32-40
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 致謝40-41

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 那榮威;載抗菌肽（KSL-W）微球的緩釋研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：622716