本文關(guān)鍵詞：齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對(duì)糞腸球菌抑菌作用研究

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【摘要】：目的:糞腸球菌(Enterococcus faeealis,E.faecalis)在再感染根管、難治性根尖周炎根管中檢出率高,是公認(rèn)的致病菌。目前常用的根管消毒藥物對(duì)于抑制根管內(nèi)糞腸球菌生長的有效性、安全性尚不能達(dá)到較為理想的效果。齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)是一種純天然藥物,毒性極低,具有良好的抑菌作用,能抑制糞腸球菌生長,國內(nèi)常用于急慢性肝炎的治療。二甲亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)是一種有機(jī)溶劑,能夠增強(qiáng)藥物的滲透性,對(duì)生物膜的滲透作用好,且其本身也具有抗菌作用,是研究齊墩果酸常用的賦形劑。但是,以往在研究齊墩果酸抑菌作用時(shí)并未考慮二甲亞砜的抗菌作用對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在的影響。我們推測齊墩果酸可能是一種理想的根管消毒藥物,齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜應(yīng)用于根管封藥有利于提高急慢性肝炎患者根管消毒的療效。故本研究將齊墩果酸溶于二甲亞砜,采用倍比稀釋法、微量棋盤稀釋法、菌落計(jì)數(shù)法、熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察等方法,研究兩種藥物聯(lián)合抑制浮游態(tài)糞腸球菌時(shí)的聯(lián)合藥敏效果,以及抑制離體牙感染根管內(nèi)和單一生物膜中的糞腸球菌生長的有效性,評(píng)價(jià)兩者藥物聯(lián)合使用時(shí)的相互影響作用,探討齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜用于糞腸球菌感染根管治療的有效性,為進(jìn)一步將齊墩果酸應(yīng)用于根管消毒提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。方法:1.采用液體倍比稀釋法和瓊脂稀釋法,分別測定二甲亞砜和齊墩果酸各自對(duì)糞腸球菌的最小抑菌濃度值(minimalinhibitoryconcentration,mic);采用96孔板微量棋盤稀釋法,通過計(jì)算抑菌濃度分?jǐn)?shù)指數(shù)(fractionalinhibitoryconcentrationindex,fici),評(píng)價(jià)兩種藥物聯(lián)用時(shí)的抑菌作用。2.收集新鮮拔除的單根管恒牙,在根管內(nèi)建立糞腸球菌感染模型。隨機(jī)將樣本分為三組:a組為1mg/ml齊墩果酸+50%二甲亞砜組(實(shí)驗(yàn)組),b組為2%醋酸氯己定組(陽性對(duì)照組),c組為去離子水組(空白對(duì)照組)。各組根管內(nèi)封藥,分別于處理前及處理1h、24h、7d時(shí)取樣,進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng),比較各組細(xì)菌量的變化,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。3.在蓋玻片上建立24h糞腸球菌單一生物膜模型,隨機(jī)分為三組:1mg/ml齊墩果酸+50%二甲亞砜組(實(shí)驗(yàn)組),2%醋酸氯己定組(陽性對(duì)照組),去離子水組(空白對(duì)照組)。各組藥物分別作用30min后,吖啶橙/溴化乙錠(ao/eb)熒光染色,置于激光共聚焦顯微鏡(confocallaserscanningmicroscope,clsm)下觀察糞腸球菌染色情況及死、活菌數(shù)量變化。結(jié)果:1.二甲亞砜對(duì)糞腸球菌的mic值為20%,齊墩果酸對(duì)糞腸球菌的mic值為100μg/ml。聯(lián)合用藥時(shí),二甲亞砜聯(lián)合齊墩果酸的最小抑菌濃度:二甲亞砜(聯(lián)合)濃度為10%,齊墩果酸(聯(lián)合)濃度為1.25μg/ml。抑菌濃度分?jǐn)?shù)指數(shù)(fici)為0.51250.5,表明齊墩果酸與二甲亞砜聯(lián)合對(duì)糞腸球菌的聯(lián)合藥敏作用表現(xiàn)為相加作用。2.對(duì)根管內(nèi)糞腸球菌菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),三組處理后比處理前細(xì)菌數(shù)量均有減少,A組、B組減少量均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),C組減少量1h、24h時(shí)不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),7d時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組所需作用時(shí)間較B組稍長,1h時(shí)兩者菌落數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),24h、7d時(shí)均能完全抑制根管內(nèi)糞腸球菌生長,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。A組、B組處理1h、24h、7d時(shí),與C組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.通過CLSM觀察三組糞腸球菌生物膜,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組生物膜中以死菌為主,僅見散在零星分布活菌。空白對(duì)照組生物膜中以活菌為主,僅存在極少量死菌。結(jié)論:齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對(duì)游離態(tài)、根管內(nèi)及單一生物膜中糞腸球菌的生長及細(xì)菌活性均具有明顯的抑制作用,可能是一種較為理想的根管消毒藥物。若應(yīng)用于臨床,可能提高根管再治療、難治性根尖周炎的治愈率。
【關(guān)鍵詞】：齊墩果酸 二甲亞砜 糞腸球菌 根管 激光共聚焦顯微鏡
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R780.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 實(shí)驗(yàn)一 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對(duì)糞腸球菌抑制作用的藥敏研究15-23
• 1 材料與方法15-19
• 2 結(jié)果19-23
• 實(shí)驗(yàn)二 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對(duì)根管內(nèi)糞腸球菌抑制作用的體外研究23-30
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-30
• 實(shí)驗(yàn)三 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對(duì)單一生物膜中糞腸球菌活性影響的體外研究30-37
• 1 材料與方法30-33
• 2 結(jié)果33-37
• 討論37-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-58
• 英漢縮略詞對(duì)照表58-59
• 致謝59-60
• 齊墩果酸的藥理作用機(jī)制及其在口腔疾病治療中的展望（綜述）60-72
• 參考文獻(xiàn)67-72

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