本文關鍵詞：齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對糞腸球菌抑菌作用研究

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【摘要】：目的:糞腸球菌(Enterococcus faeealis,E.faecalis)在再感染根管、難治性根尖周炎根管中檢出率高,是公認的致病菌。目前常用的根管消毒藥物對于抑制根管內糞腸球菌生長的有效性、安全性尚不能達到較為理想的效果。齊墩果酸(Oleanolic acid,OA)是一種純天然藥物,毒性極低,具有良好的抑菌作用,能抑制糞腸球菌生長,國內常用于急慢性肝炎的治療。二甲亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)是一種有機溶劑,能夠增強藥物的滲透性,對生物膜的滲透作用好,且其本身也具有抗菌作用,是研究齊墩果酸常用的賦形劑。但是,以往在研究齊墩果酸抑菌作用時并未考慮二甲亞砜的抗菌作用對實驗結果可能存在的影響。我們推測齊墩果酸可能是一種理想的根管消毒藥物,齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜應用于根管封藥有利于提高急慢性肝炎患者根管消毒的療效。故本研究將齊墩果酸溶于二甲亞砜,采用倍比稀釋法、微量棋盤稀釋法、菌落計數(shù)法、熒光染色激光共聚焦顯微鏡觀察等方法,研究兩種藥物聯(lián)合抑制浮游態(tài)糞腸球菌時的聯(lián)合藥敏效果,以及抑制離體牙感染根管內和單一生物膜中的糞腸球菌生長的有效性,評價兩者藥物聯(lián)合使用時的相互影響作用,探討齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜用于糞腸球菌感染根管治療的有效性,為進一步將齊墩果酸應用于根管消毒提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。方法:1.采用液體倍比稀釋法和瓊脂稀釋法,分別測定二甲亞砜和齊墩果酸各自對糞腸球菌的最小抑菌濃度值(minimalinhibitoryconcentration,mic);采用96孔板微量棋盤稀釋法,通過計算抑菌濃度分數(shù)指數(shù)(fractionalinhibitoryconcentrationindex,fici),評價兩種藥物聯(lián)用時的抑菌作用。2.收集新鮮拔除的單根管恒牙,在根管內建立糞腸球菌感染模型。隨機將樣本分為三組:a組為1mg/ml齊墩果酸+50%二甲亞砜組(實驗組),b組為2%醋酸氯己定組(陽性對照組),c組為去離子水組(空白對照組)。各組根管內封藥,分別于處理前及處理1h、24h、7d時取樣,進行細菌計數(shù)培養(yǎng),比較各組細菌量的變化,并進行統(tǒng)計學分析。3.在蓋玻片上建立24h糞腸球菌單一生物膜模型,隨機分為三組:1mg/ml齊墩果酸+50%二甲亞砜組(實驗組),2%醋酸氯己定組(陽性對照組),去離子水組(空白對照組)。各組藥物分別作用30min后,吖啶橙/溴化乙錠(ao/eb)熒光染色,置于激光共聚焦顯微鏡(confocallaserscanningmicroscope,clsm)下觀察糞腸球菌染色情況及死、活菌數(shù)量變化。結果:1.二甲亞砜對糞腸球菌的mic值為20%,齊墩果酸對糞腸球菌的mic值為100μg/ml。聯(lián)合用藥時,二甲亞砜聯(lián)合齊墩果酸的最小抑菌濃度:二甲亞砜(聯(lián)合)濃度為10%,齊墩果酸(聯(lián)合)濃度為1.25μg/ml。抑菌濃度分數(shù)指數(shù)(fici)為0.51250.5,表明齊墩果酸與二甲亞砜聯(lián)合對糞腸球菌的聯(lián)合藥敏作用表現(xiàn)為相加作用。2.對根管內糞腸球菌菌落數(shù)進行統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),三組處理后比處理前細菌數(shù)量均有減少,A組、B組減少量均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),C組減少量1h、24h時不具有統(tǒng)計學意義(P0.05),7d時差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。A組所需作用時間較B組稍長,1h時兩者菌落數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),24h、7d時均能完全抑制根管內糞腸球菌生長,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。A組、B組處理1h、24h、7d時,與C組相比差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.通過CLSM觀察三組糞腸球菌生物膜,結果顯示實驗組、陽性對照組生物膜中以死菌為主,僅見散在零星分布活菌�？瞻讓φ战M生物膜中以活菌為主,僅存在極少量死菌。結論:齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對游離態(tài)、根管內及單一生物膜中糞腸球菌的生長及細菌活性均具有明顯的抑制作用,可能是一種較為理想的根管消毒藥物。若應用于臨床,可能提高根管再治療、難治性根尖周炎的治愈率。
【關鍵詞】：齊墩果酸 二甲亞砜 糞腸球菌 根管 激光共聚焦顯微鏡
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R780.2
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 實驗一 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對糞腸球菌抑制作用的藥敏研究15-23
• 1 材料與方法15-19
• 2 結果19-23
• 實驗二 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對根管內糞腸球菌抑制作用的體外研究23-30
• 1 材料與方法23-26
• 2 結果26-30
• 實驗三 齊墩果酸聯(lián)合二甲亞砜對單一生物膜中糞腸球菌活性影響的體外研究30-37
• 1 材料與方法30-33
• 2 結果33-37
• 討論37-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-58
• 英漢縮略詞對照表58-59
• 致謝59-60
• 齊墩果酸的藥理作用機制及其在口腔疾病治療中的展望（綜述）60-72
• 參考文獻67-72

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本文編號：612945