目的:探討兔骨膜細胞和BMSCs在不同大小的周期性機械離心應(yīng)力刺激下向成骨細胞分化情況。方法:取兔顱骨骨膜細胞、股骨骨髓細胞體外培養(yǎng),傳至第三代,分為加力組和對照組,使用低速離心機加載離心力。加力組給予10 min/d,離心力分別為170g、210g、259g的應(yīng)力刺激。對照組置于超凈臺10min/d,常規(guī)培養(yǎng)。測定各組細胞成骨礦化能力、ALP活力及細胞增殖情況;實時熒光定量PCR法測定兩種細胞的成骨相關(guān)基因骨鈣素(OCN)、RUNX2 mRNA的相對表達量。結(jié)果:周期性機械離心力刺激后1-9d兩種細胞增殖活性、3-14d ALP活性均升高,加載后兩周加力組細胞礦化結(jié)節(jié)的數(shù)目、細胞成骨相關(guān)的基因骨鈣素OCN和RUNX2 mRNA的相對表達量顯著增加。與對照組相比加力組上述各項指標(biāo)增長更顯著,其中骨膜細胞250g組增長情況最為顯著(P<0.05)。結(jié)論:周期性機械離心力刺激可促進兔骨膜細胞、BMSCs體外增殖和礦化,促進成骨相關(guān)基因OCN、RUNX2的表達,其中以離心力大小為250g組最為顯著。加載等量的離心力,骨膜細胞的增殖和礦化能力較BMSCs更為顯著。

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圖1骨膜細胞受力分析

圖1骨膜細胞受力分析Fig.1PeriostealcellstressanalysisP3代骨膜細胞骨膜細胞，每天給予10min170g機械離心

圖2A骨膜細胞

圖2A骨膜細胞圖2B單克隆來源骨膜細胞Fig.2APeriostealcellsFig.2BMonoclonalsourceperi

圖2B單克隆來源骨膜細胞

細胞形態(tài)如圖2A示呈梭形、三角形或多角形。經(jīng)過單克隆篩選純化后，細胞形態(tài)均一以梭形為主（圖2B）。骨膜細胞傳代后顯微鏡下觀察細胞，細胞數(shù)目明顯增多且呈旋渦狀平行生長（圖2C）。骨膜細胞經(jīng)礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)3周后行鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色呈陽性，顯微鏡下可見礦化結(jié)節(jié)（圖2D）。....

圖2C第二代骨膜細胞

圖2C第二代骨膜細胞圖2D骨膜細胞礦化誘導(dǎo)3周Fig.2CSecondgenerationFig.2DPeriostealcellmineralizaperiostealcellsfor3weeks儀分析結(jié)果顯示：如圖3，原代骨膜細胞表達CD....

本文編號：4029714