目的本研究旨在探討種植體脫落納米級鈦顆粒對牙槽骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Al-BMSCs增殖的影響及機制。方法分離培養(yǎng)大鼠牙槽骨來源的Al-BMSCs,與納米級鈦顆粒共培養(yǎng)后,臺盼藍(lán)染色細(xì)胞計數(shù)法及CCK8法檢測細(xì)胞增殖。Al-BMSCs轉(zhuǎn)染熒光素酶標(biāo)記的4XSBE質(zhì)粒與納米級鈦顆粒共培養(yǎng)后,通過檢測熒光素酶活性及ELISA法檢測TGF-β1表達水平,評估TGF-β信號通路活性。PCR檢測Smad7表達水平。通過轉(zhuǎn)染特異性siRNA敲減Al-BMSCs中Smad7表達水平,與納米級鈦顆粒共培養(yǎng)后,觀察Al-BMSCs增殖及TGF-β信號通路活性。結(jié)果納米級鈦顆粒明顯抑制Al-BMSCs增殖及TGF-β信號通路活性。ELISA檢測發(fā)現(xiàn),Al-BMSCs的TGF-β1分泌水平無明顯改變。PCR檢測發(fā)現(xiàn)Smad7表達上調(diào)。利用siRNA敲減Al-BMSCs中Smad7的表達后發(fā)現(xiàn),納米級鈦顆粒對Al-BMSCs增殖及TGF-β信號通路活性的抑制減弱。結(jié)論納米級鈦顆粒通過上調(diào)Smad7抑制TGF-β信號通路活性及大鼠Al-BMSCs增殖。

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圖2檢測大鼠Al-BMSCs不同時間點細(xì)胞增殖A:臺盼藍(lán)染色計數(shù)法;B:CCK8法

5.敲減Smad7可阻斷納米級鈦顆粒對AlBMSCs增殖的抑制作用圖3TGF-β信號通路活性檢測A:報告基因4XSBE熒光素酶活性;B:細(xì)胞上清液TGF-β1含量

圖3TGF-β信號通路活性檢測A:報告基因4XSBE熒光素酶活性;B:細(xì)胞上清液TGF-β1含量

圖2檢測大鼠Al-BMSCs不同時間點細(xì)胞增殖A:臺盼藍(lán)染色計數(shù)法;B:CCK8法Smad7siRNA轉(zhuǎn)染Al-BMSCs后，細(xì)胞內(nèi)Smad7基因(圖5A)和蛋白(圖5B)表達水平明顯降低。利用熒光素酶報告質(zhì)粒4XSBE轉(zhuǎn)染敲減Smad7的Al-BMSCs，與納米級鈦顆粒共培....

圖1大鼠Al-BMSCs原代培養(yǎng)及體外成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)(×200)A:原代Al-BMSCs光學(xué)顯微鏡下圖;B:Al-BMSCs體外培養(yǎng)1周后Msaon染色;C:Al-BMSCs成骨誘導(dǎo)分化2周后vonKossa染色

Smad7siRNA轉(zhuǎn)染Al-BMSCs后，細(xì)胞內(nèi)Smad7基因(圖5A)和蛋白(圖5B)表達水平明顯降低。利用熒光素酶報告質(zhì)粒4XSBE轉(zhuǎn)染敲減Smad7的Al-BMSCs，與納米級鈦顆粒共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)Smad7敲減的Al-BMSCs中4XSBE熒光素酶報告基因活性明顯提高（P....

圖6檢測敲減Smad7基因的大鼠AL-BMSCs增殖

TGF-β信號通路在細(xì)胞增殖分化中發(fā)揮核心調(diào)節(jié)作用。當(dāng)TGF-β配體與一型和二型受體結(jié)合后，二型受體磷酸化一型受體，進而導(dǎo)致胞內(nèi)信號中間體Smad2和Smad3磷酸化。磷酸化的Smad2和Smad3進一步結(jié)合Smad4,共同進入細(xì)胞核，啟動下游目的基因表達，進而發(fā)揮生物學(xué)作用[2....

本文編號：3894652