目的:觀察大鼠成肌細(xì)胞(L6 myoblast,L6)在周期性機(jī)械應(yīng)力作用下細(xì)胞凋亡與自噬的水平變化,探討機(jī)械應(yīng)力誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬對凋亡的作用。方法:構(gòu)建大鼠成肌細(xì)胞力學(xué)刺激模型,加載參數(shù)為細(xì)胞拉伸形變率15%,加力周期包括3 s拉伸及3 s舒張,加力時間為6、12、24 h,以不加力0 h組為對照組。通過Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI染色觀察各組細(xì)胞凋亡情況;通過MDC染色及透射電鏡(transmission electron microscopy,TEM)評價各組細(xì)胞自噬變化;應(yīng)用Western免疫印跡檢測各組凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax及自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、P62表達(dá)變化。加入自噬抑制劑3-MA后重復(fù)實驗,檢測各組細(xì)胞凋亡情況。采用SPSS 17.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:Hoechst染色及AnnexinV-FITC/PI流式結(jié)果表明,大鼠成肌細(xì)胞在周期性應(yīng)力誘導(dǎo)下發(fā)生凋亡,24 h時達(dá)到凋亡最大值。Western免疫印跡結(jié)果顯示,凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平隨加力時間延長而逐漸升高, caspase抑...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實驗材料和儀器
    1.2 大鼠成肌細(xì)胞培養(yǎng)和體外應(yīng)力加載模型的建立
    1.3 Hoechest 33258染色
    1.4 AnnexinV-FITC/PI染色
    1.5 Monodansylcadaverine(MDC)染色
    1.6 透射電鏡（transmission electron microscopy,TEM）掃描
    1.7 Western蛋白印跡檢測
    1.8 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 周期性應(yīng)力作用下大鼠成肌細(xì)胞凋亡變化趨勢
    2.2 周期性應(yīng)力介導(dǎo)的大鼠成肌細(xì)胞凋亡依賴caspase途徑調(diào)節(jié)
    2.3 周期性應(yīng)力誘導(dǎo)大鼠成肌細(xì)胞自噬
    2.4 自噬抑制周期性應(yīng)力誘導(dǎo)的caspase依賴的成肌細(xì)胞凋亡
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