目的:探究慢病毒介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（Bone Morphogenetic protein 2,BMP-2）及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165（Vascular endothelial growth factor 165）轉(zhuǎn)染山羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨方向分化的影響;方法:采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)原代山羊的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,傳代后在慢病毒的介導(dǎo)下導(dǎo)入目的基因,研究山羊BMSCs作為基因共轉(zhuǎn)移靶細(xì)胞的可行性,以及細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件、增殖情況,轉(zhuǎn)染后向成骨方向分化等生物學(xué)變化。結(jié)果:BMP-2 mRNA的表達(dá)與BMP-2組無(wú)明顯差異（P＞0.05）,VEGF-165mRNA的表達(dá)與VEGF-165組無(wú)明顯差異（P＞0.05）;Lv-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染組OCN mRN A的表達(dá)高于單基因轉(zhuǎn)染組（P＜0.05）;BMP2和VEGF165蛋白只有在Lv-BMP2-VEGF165組中高效率表達(dá);Lv-BMP2-VEGF165組OCN蛋白的表達(dá)顯著高于其他各組（p＜0.01）,Lv-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
前言
1 研究?jī)?nèi)容與方法
    1.1 研究對(duì)象
    1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)
        1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)
        1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)
    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
    1.4 實(shí)驗(yàn)分組
    1.5 全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)山羊BMSCs
    1.6 茜素紅染色(PH=8.3)檢測(cè)細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化
    1.7 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性
    1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.8.1 細(xì)胞的準(zhǔn)備
        1.8.2 慢病毒感染預(yù)實(shí)驗(yàn)
        1.8.3 轉(zhuǎn)染后引物的設(shè)計(jì)及BMP-2、VEGF-165mRNA的檢測(cè)
        1.8.4 轉(zhuǎn)染后ELISA法檢測(cè)各組BMP-2、VEGF-165、OCN相對(duì)蛋白的表達(dá)
    1.9 質(zhì)量控制
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.11 技術(shù)路線圖
2 結(jié)果
    2.1 原代細(xì)胞貼壁法分離純化及鑒定
    2.2 茜素紅染色(PH=8.3)檢測(cè)細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化
    2.3 MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生長(zhǎng)活性
    2.4 各組BMP2mRNA、VEGF165mRNA、OCNmRNA的表達(dá)
    2.5 各組BMP2、VEGF165 蛋白、OCN蛋白的表達(dá)
    2.6 轉(zhuǎn)染后堿性磷酸酶活性的檢測(cè)(改良Gomori鈣鈷法)
3 討論
    3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
        3.1.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離及純化
        3.1.2 BMP-2、VEGF-165 定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的機(jī)制
    3.2 慢病毒作為載體的相關(guān)研究
    3.3 成骨機(jī)制及指標(biāo)
    3.4 創(chuàng)新與意義
    3.5 不足與展望
4 小結(jié)
    4.1 結(jié)論一
    4.2 結(jié)論二
5 致謝
6 參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多種特殊狀態(tài)下關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的組織工程技術(shù)[J]. 陳勁松,王中漢,常非,劉賀.  中國(guó)組織工程研究. 2020(08)
[2]控釋重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的微囊支架對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的影響[J]. 任前貴,張坤,任威,孫韜,李永峰,馬麗波.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019(12)
[3]補(bǔ)腎活血方對(duì)大鼠骨折模型的愈合作用及對(duì)BMP-2、VEGF及TGF-β1表達(dá)的影響[J]. 陳冠儒,張翔,許兵.  中國(guó)中醫(yī)急癥. 2019(12)
[4]慢病毒介導(dǎo)骨形態(tài)發(fā)生蛋白7基因轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化[J]. 張文,雷堃,高磊,李寬新.  中國(guó)組織工程研究. 2020(07)
[5]生物支架材料誘導(dǎo)脂肪來(lái)源干細(xì)胞成骨分化的最新熱點(diǎn)[J]. 張圣敏,劉超.  中國(guó)組織工程研究. 2020(07)
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[7]3D打印聚己內(nèi)酯/納米羥基磷灰石復(fù)合支架與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外生物相容性[J]. 胡超然,邱冰,周祝興,楊洋,李佳.  中國(guó)組織工程研究. 2020(04)
[8]ERK1/2-Runx2信號(hào)通路在TNF-α對(duì)牙周膜干細(xì)胞成骨分化影響中的作用[J]. 韓耀倫,王璐,馬欣.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019(21)
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[10]微RNA調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究進(jìn)展[J]. 王宏潤(rùn),李宏宇.  醫(yī)學(xué)綜述. 2019(20)

碩士論文
[1]人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞系的建立[D]. 王旭東.內(nèi)蒙古大學(xué) 2019
[2]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體對(duì)大鼠脊髓損傷后周細(xì)胞活化及血脊髓屏障的影響[D]. 張銳毅.鄭州大學(xué) 2019



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