目的:探究慢病毒介導骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（Bone Morphogenetic protein 2,BMP-2）及血管內(nèi)皮生長因子165（Vascular endothelial growth factor 165）轉(zhuǎn)染山羊骨髓間充質(zhì)干細胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨方向分化的影響;方法:采用全骨髓貼壁法培養(yǎng)原代山羊的骨髓間充質(zhì)干細胞,傳代后在慢病毒的介導下導入目的基因,研究山羊BMSCs作為基因共轉(zhuǎn)移靶細胞的可行性,以及細胞的體外培養(yǎng)條件、增殖情況,轉(zhuǎn)染后向成骨方向分化等生物學變化。結(jié)果:BMP-2 mRNA的表達與BMP-2組無明顯差異（P＞0.05）,VEGF-165mRNA的表達與VEGF-165組無明顯差異（P＞0.05）;Lv-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染組OCN mRN A的表達高于單基因轉(zhuǎn)染組（P＜0.05）;BMP2和VEGF165蛋白只有在Lv-BMP2-VEGF165組中高效率表達;Lv-BMP2-VEGF165組OCN蛋白的表達顯著高于其他各組（p＜0.01）,Lv-BMP2-VEGF165轉(zhuǎn)染... 

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
Abstract
前言
1 研究內(nèi)容與方法
    1.1 研究對象
    1.2 納入排除標準
        1.2.1 納入標準
        1.2.2 排除標準
    1.3 實驗試劑與儀器
    1.4 實驗分組
    1.5 全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)山羊BMSCs
    1.6 茜素紅染色(PH=8.3)檢測細胞成骨誘導分化
    1.7 MTT法檢測細胞增殖活性
    1.8 細胞轉(zhuǎn)染
        1.8.1 細胞的準備
        1.8.2 慢病毒感染預(yù)實驗
        1.8.3 轉(zhuǎn)染后引物的設(shè)計及BMP-2、VEGF-165mRNA的檢測
        1.8.4 轉(zhuǎn)染后ELISA法檢測各組BMP-2、VEGF-165、OCN相對蛋白的表達
    1.9 質(zhì)量控制
    1.10 統(tǒng)計學分析
    1.11 技術(shù)路線圖
2 結(jié)果
    2.1 原代細胞貼壁法分離純化及鑒定
    2.2 茜素紅染色(PH=8.3)檢測細胞成骨誘導分化
    2.3 MTT法檢測轉(zhuǎn)染前后細胞的生長活性
    2.4 各組BMP2mRNA、VEGF165mRNA、OCNmRNA的表達
    2.5 各組BMP2、VEGF165 蛋白、OCN蛋白的表達
    2.6 轉(zhuǎn)染后堿性磷酸酶活性的檢測(改良Gomori鈣鈷法)
3 討論
    3.1 骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)
        3.1.1 骨髓間充質(zhì)干細胞分離及純化
        3.1.2 BMP-2、VEGF-165 定向誘導骨髓間充質(zhì)干細胞的機制
    3.2 慢病毒作為載體的相關(guān)研究
    3.3 成骨機制及指標
    3.4 創(chuàng)新與意義
    3.5 不足與展望
4 小結(jié)
    4.1 結(jié)論一
    4.2 結(jié)論二
5 致謝
6 參考文獻
綜述
    參考文獻
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【參考文獻】：
期刊論文
[1]多種特殊狀態(tài)下關(guān)節(jié)軟骨缺損修復(fù)的組織工程技術(shù)[J]. 陳勁松,王中漢,常非,劉賀.  中國組織工程研究. 2020(08)
[2]控釋重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2和血管內(nèi)皮生長因子的微囊支架對骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化的影響[J]. 任前貴,張坤,任威,孫韜,李永峰,馬麗波.  中國生物制品學雜志. 2019(12)
[3]補腎活血方對大鼠骨折模型的愈合作用及對BMP-2、VEGF及TGF-β1表達的影響[J]. 陳冠儒,張翔,許兵.  中國中醫(yī)急癥. 2019(12)
[4]慢病毒介導骨形態(tài)發(fā)生蛋白7基因轉(zhuǎn)染誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞的分化[J]. 張文,雷堃,高磊,李寬新.  中國組織工程研究. 2020(07)
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[6]骨化醇治療對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松婦女血清硬化素及成纖維細胞 生長因子23水平的影響[J]. 周士進,徐毅.  臨床與病理雜志. 2019(11)
[7]3D打印聚己內(nèi)酯/納米羥基磷灰石復(fù)合支架與骨髓間充質(zhì)干細胞的體外生物相容性[J]. 胡超然,邱冰,周祝興,楊洋,李佳.  中國組織工程研究. 2020(04)
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[9]pEGFP-N1-BRCC3重組質(zhì)粒的構(gòu)建、鑒定及其表達[J]. 程芯育,鐘海鳳,徐紹業(yè),張聰慧,韋睿妮,邵曉云.  廣東醫(yī)學. 2019(19)
[10]微RNA調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的研究進展[J]. 王宏潤,李宏宇.  醫(yī)學綜述. 2019(20)

碩士論文
[1]人誘導多能干細胞系的建立[D]. 王旭東.內(nèi)蒙古大學 2019
[2]骨髓間充質(zhì)干細胞來源外泌體對大鼠脊髓損傷后周細胞活化及血脊髓屏障的影響[D]. 張銳毅.鄭州大學 2019



本文編號：3726896