顱頜面部最常見的一種先天性發(fā)育畸形是腭裂,它具有復(fù)雜的病因,并且會(huì)影響病人的語音功能、吞咽功能以及隨后的牙齒萌發(fā)和排列。研究發(fā)現(xiàn),在小鼠腭的正常發(fā)育過程中有幾種不同的信號通路均起著至關(guān)重要的作用,主要包括FGF（Fibroblast growth factors）信號通路、WNT（Wingless integrated）信號通路、SHH（Sonic hedgehog）信號通路和BMP（Bone morphogenetic proteins）信號通路。近年來人類全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn),人類的唇腭裂疾病與FGF18緊密相關(guān)。因此為探究FGF18在人類腭裂中的作用機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了Wnt1-Cre;pMes-Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠,以研究小鼠神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18對其顱頜面部發(fā)育的影響。首先,運(yùn)用原核顯微注射技術(shù)成功構(gòu)建了pMes-Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠;將成年的pMes-Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠與Wnt1-Cre小鼠交配,獲得在神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18的轉(zhuǎn)基因小鼠Wnt1-Cre;pMes-Fgf18。通過組織形態(tài)學(xué)觀察,發(fā)現(xiàn)Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠發(fā)生腭裂,且出生后大約... 

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中文文摘
緒論
第一章 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 菌株、質(zhì)粒與載體
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.5 試劑配制
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 目的基因擴(kuò)增
        1.2.2 重組質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定
        1.2.4 石蠟包埋與切片
        1.2.5 HE染色
        1.2.6 石蠟切片免疫組化/熒光
        1.2.7 整骨染色
        1.2.8 腭的體外培養(yǎng)
        1.2.9 整體原位雜交
第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    2.1 pMes-Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建
        2.1.1 pMes-Fgf18-IRES-eGFP質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.1.2 pMes-Fgf18-IRES-eGFP質(zhì)粒酶切線性化
        2.1.3 原核顯微注射制備pMes-Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠
        2.1.4 條件性過表達(dá)Fgf18轉(zhuǎn)基因小鼠的有效性驗(yàn)證
    2.2 神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18導(dǎo)致小鼠顱頜面部發(fā)育嚴(yán)重異常
    2.3 神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18對小鼠上腭發(fā)育的影響
    2.4 神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18引起小鼠腭裂的機(jī)制
        2.4.1 Wrt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠腭突的細(xì)胞增殖水平無顯著性變化
        2.4.2 Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠腭突在體外培養(yǎng)過程中能正常發(fā)育
        2.4.3 Wnt1-Cre;pMes-Fgf18小鼠的舌頭及下頜骨發(fā)育異常
    2.5 Fgf18在小鼠顱面部器官發(fā)育過程中主要調(diào)控的下游信號通路
第三章 分析與討論
    3.1 神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18導(dǎo)致小鼠腭裂
    3.2 小鼠神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18導(dǎo)致的腭裂是由舌體增高、下頜縮短引起的
    3.3 小鼠神經(jīng)嵴細(xì)胞中過表達(dá)Fgf18改變了RAS/MAPK信號級聯(lián)反應(yīng)水平
第四章 結(jié)論
附錄
    附錄1 基因和蛋白質(zhì)符號說明
    附錄2 引物
    附錄3 質(zhì)粒載體
    附錄4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Differential expression of Bmp2,Bmp4 and Bmp3 in embryonic development of mouse anterior and posterior palate[J]. NIE Xu-guang Sector of Anatomy and Cell Biology, Department of Biomedicine, University of Ber gen, Norway.  Chinese Medical Journal. 2005(20)



本文編號：3715637