本文關(guān)鍵詞：未折疊蛋白反應(yīng)在增強口腔鱗癌藥物治療敏感性中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 1.探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78在口腔鱗癌組織中的表達與臨床病理特征及預(yù)后間的關(guān)系。 2.探討口腔鱗癌細胞對化療藥物的敏感性與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78表達的關(guān)系。 方法： 1.統(tǒng)計學分析GRP78的表達與口腔鱗癌患者臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系； 2. MTT法探討奧沙利鉑、衣酶素以及二者合用24、48、72h后對人口腔鱗癌KB細胞存活率的影響，以明確其劑量-效應(yīng)關(guān)系； 3.集落克隆法探討奧沙利鉑、衣酶素單獨及聯(lián)合使用對人口腔鱗癌KB細胞集落克隆形成的抑制作用； 4. PI單染，檢測奧沙利鉑、衣酶素以及二者合處理人口腔鱗癌細胞KB24h后對誘導(dǎo)人口腔鱗癌細胞凋亡的影響； 5. Western blot法探討奧沙利鉑、衣酶素以及二者合用處理人口腔鱗癌細胞KB24h后對人口腔鱗癌細胞KB GRP78、Caspase-12表達的影響； 6. Caspase-3活性試劑盒檢測Caspae-3活性； 7. siRNA法下調(diào)GRP78后，Western blot法檢測口腔鱗癌細胞中GRP78蛋白的表達，PI單染檢測下調(diào)GRP78后奧沙利鉑對人口腔鱗癌細胞KB凋亡的影響。 結(jié)果： 一、GRP78在口腔鱗癌患者組織中的表達與臨床病理特征、預(yù)后關(guān)系的相關(guān)性 1. GRP78和口腔鱗癌患者臨床病理特征間的關(guān)系 GRP78的陽性表達與患者的腫瘤直徑、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠距離轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理分化程度等因素有關(guān)且具有統(tǒng)計學意義。GRP78的表達與年齡、性別、抽煙、飲酒等因素無關(guān)。 2. GRP78陽性表達的患者預(yù)后的存活率低于GRP78陰性表達的患者。 3. Cox模型分析年齡、遠距離轉(zhuǎn)移、GRP78陽性表達是影響口腔鱗癌患者生存期的風險因子。 二、衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑對人口腔鱗癌KB細胞增殖及凋亡的影響 1.衣霉素增強奧沙利鉑對人口腔鱗癌KB細胞增殖的抑制作用 衣霉素單獨作用于人口腔鱗癌KB細胞24、48、72h后，口腔鱗癌KB細胞存活率為90.37%、89.44%、88.91%；奧沙利鉑單獨作用于人口腔鱗癌KB細胞24、48、72h后，口腔鱗癌KB細胞存活率分別為62.36%、47.54%、40.47%。衣霉素與奧沙利鉑聯(lián)合使用作用與人口腔鱗癌KB細胞24、48、72h后，，口腔鱗癌KB細胞的存活率為50.78%、37.77%、23.24%，結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P 0.05，見圖1)。 2.衣霉素增強奧沙利鉑對人口腔鱗癌KB細胞集落克隆形成的抑制作用 0.25μmol/L衣霉素、0.125μmol/L奧沙利鉑單獨以及聯(lián)合使用作用于人口腔鱗癌KB細胞，結(jié)果表明，衣霉素在低濃度即可明顯抑制人口腔鱗癌KB細胞的集落克隆形成，聯(lián)合使用時可提高奧沙利鉑對人口腔鱗癌KB細胞集落克隆形成的抑制作用。 3.衣霉素增強奧沙利鉑誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細胞凋亡的作用 0.5μmol/L衣霉素作用于人口腔鱗癌KB細胞48h后，人口腔鱗癌KB細胞的凋亡率為8.3%。0.25μmol/L奧沙利鉑作用于人口腔鱗癌KB細胞48h后，人口腔鱗癌KB細胞凋亡率為12.2%。0.5μmol/L衣霉素與0.25μmol/L奧沙利鉑聯(lián)合作用于人口腔鱗癌KB細胞48h后，誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細胞的凋亡率為26.2%。 4.衣霉素增強奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌KB細胞的Caspase-3激活作用 低濃度衣霉素作用人口腔鱗癌KB細胞后，Caspase-3的活性并未出現(xiàn)明顯提高，但衣霉素與奧沙利鉑聯(lián)合使用時可明顯提高奧沙利鉑對人口腔鱗癌KB細胞Caspase-3的激活作用。 5.衣霉素可提高奧沙利鉑誘導(dǎo)的人口腔鱗癌KB細胞的GRP78、Caspase-12和Caspase-3蛋白的表達 衣霉素可誘導(dǎo)人口腔鱗癌KB細胞GRP-78的表達，衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑作用于人口腔鱗癌KB細胞后，可誘導(dǎo)GRP-78更強烈的的表達。衣霉素、奧沙利鉑聯(lián)合使用使得Caspase-12、Caspase-3蛋白的表達高于單獨用藥組。 三、下調(diào)GRP78具有增強奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡的敏感性 1.SiRNA轉(zhuǎn)染效率的檢測 將不同序列的siRNA-GRP78和空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進入口腔鱗癌細胞KB中，用Western blot法檢測了口腔鱗癌細胞KB中GRP78的表達，與對照轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-GRP78組中GRP78表達明顯降低。 2.SiRNA轉(zhuǎn)染對奧沙利鉑誘導(dǎo)細胞凋亡增敏作用 將口腔鱗癌細胞KB進行轉(zhuǎn)染下調(diào)GRP78后，奧沙利鉑對口腔鱗癌細胞KB凋亡率明顯升高，與單用奧沙利鉑組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組相比，具有統(tǒng)計學意義。結(jié)論： 1.口腔鱗癌組織中GRP78在蛋白水平上的表達量明顯高于其在正常組織中的表達量 2.口腔鱗癌組織中GRP78在蛋白水平上的表達量與臨床病理特征、預(yù)后情況存在相關(guān)性，可以作為一個潛在口腔鱗癌癥標記物用以判斷口腔鱗癌的惡性程度以及預(yù)測其預(yù)后。 3.急性或過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對腫瘤細胞的促凋亡作用大于保護作用。 4.下調(diào)GRP78后，化療藥物誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡率明顯上升，由此證明GRP78在口腔鱗癌中具有的保護作用。
【關(guān)鍵詞】：口腔鱗癌 奧沙利鉑 衣酶素 siRNA 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 GRP78 Caspase-3 Caspase-12 凋亡 免疫組化 預(yù)后 干擾RNA
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.8
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 引言11-13
• 材料與方法13-23
• 1. 材料與儀器13-14
• 2. 實驗方法14-22
• 2.1 免疫組織化學方法檢測 GRP78 的表達14-15
• 2.2 細胞培養(yǎng)15-16
• 2.3 MTT 法檢測細胞存活率16-17
• 2.4 集落克隆形成實驗17
• 2.5 PI 染色檢測凋亡17-18
• 2.6 Capases-3 活性檢測18-19
• 2.7 siRNA 轉(zhuǎn)染19
• 2.8 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白的表達19-22
• 3. 統(tǒng)計學處理22-23
• 結(jié)果23-31
• 1 GRP78 在口腔鱗癌患者中的表達與臨床病理特征、預(yù)后關(guān)系的相關(guān)性23-26
• 2 衣霉素聯(lián)合奧沙利鉑對 KB 細胞增殖及凋亡26-29
• 3 下調(diào) GRP78 具有增強奧沙利鉑誘導(dǎo)口腔鱗癌細胞凋亡的敏感性29-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-39
• 致謝39-40
• 附錄 A 英中文術(shù)語縮略語對照表40-41
• 附錄 B 主要試劑配制方法41-44
• 附錄 C 個人簡歷及發(fā)表論文44-45
• 附錄 D 綜述45-53
• 參考文獻50-53

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 浦龍健;黃瑩瑩;李陽;徐錦程;蔣琛琛;劉浩;蔣志文;;siRNA沉默葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78可增強乳腺癌細胞對順鉑的敏感性[J];南方醫(yī)科大學學報;2013年01期

2 董瑞華;趙巍;王立明;張旭光;吳坤;;酸性神經(jīng)磷脂酶在維生素E琥珀酸酯誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡過程中對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響[J];癌變.畸變.突變;2013年05期

3 胡敏;趙品;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與心肌缺血再灌注損傷[J];長沙醫(yī)學院學報;2013年04期

4 Su-zhen Jiang;Jia-jia Zheng;Xiang-Mei Chen;Ting Zhang;Qiang Xu;Hui Zhuang;Feng-min Lu;;Hepatitis B Virus S Promoter Deletion in Hepatocellular Carcinoma[J];Infection International(Electronic Edition);2012年01期

5 浦龍健;劉浩;蔣琛琛;;腫瘤多藥耐藥機制及逆轉(zhuǎn)策略的研究進展[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2014年03期

6 王新瓊;柳志文;;GRP78在口腔黏膜下纖維性變組織中的表達及意義[J];廣東牙病防治;2014年05期

7 袁磊;徐斌;張海霞;錢詩蕾;龔濟欽;段雄;禹華旭;;以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激淺談糖尿病及其并發(fā)腦病的研究進展[J];解剖學研究;2014年05期

8 黎永華;陶力;林穎;李光宇;陳嫦;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在小鼠急性肝損傷中的作用機制[J];廣東醫(yī)學;2015年01期

9 秦勤;李元海;;GRP78與CHOP在缺血再灌注損傷中的作用[J];安徽醫(yī)藥;2015年02期

10 于洋;徐冶;劉師兵;衣丹;李松巖;王曉軍;;過氧化氫通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路對Hela細胞自噬和凋亡的誘導(dǎo)作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2015年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 浦龍健;劉浩;蔣琛琛;;腫瘤多藥耐藥機制及逆轉(zhuǎn)策略的研究進展[A];促進科技經(jīng)濟結(jié)合，服務(wù)創(chuàng)新驅(qū)動發(fā)展——蚌埠市科協(xié)2012年度學術(shù)年會論文集[C];2012年

2 浦龍健;黃瑩瑩;李陽;徐錦程;蔣琛琛;劉浩;蔣志文;;siRNA沉默GRP78增強乳腺癌細胞對順鉑敏感性的作用[A];促進科技經(jīng)濟結(jié)合，服務(wù)創(chuàng)新驅(qū)動發(fā)展——蚌埠市科協(xié)2012年度學術(shù)年會論文集[C];2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 常曉慧;組分中藥金智達對認知功能的改善及其相關(guān)機制的研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

2 李晶晶;EGCG通過Ku70及其乙�；T導(dǎo)人肺腺癌細胞株凋亡的初步研究[D];中南大學;2013年

3 邱進;對聯(lián)三苯類拓撲異構(gòu)酶抑制劑的合成及抗腫瘤活性研究[D];山東大學;2013年

4 黃曉莉;維素E琥珀酸酯誘導(dǎo)胃癌細胞凋過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與氧化應(yīng)激的互作用[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2012年

5 王林龍;糖尿病所致骨關(guān)節(jié)炎易感及發(fā)生機制研究[D];武漢大學;2014年

6 史可鑒;硒誘導(dǎo)白血病細胞自噬和凋亡的分子機制[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

7 王啟明;基于聚谷氨酸構(gòu)象轉(zhuǎn)變構(gòu)建納米靶向復(fù)合膠束及其抗黑色素瘤研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

8 曾憲思;環(huán)境毒性物MPTP帕金森病模型中硫氧還蛋白抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的分子機理[D];昆明理工大學;2014年

9 張帆;小鼠重組糖調(diào)節(jié)蛋白78誘導(dǎo)DC的生物學特性研究[D];華中科技大學;2014年

10 盧童;應(yīng)用小RNA下調(diào)GRP78表達與上調(diào)KLF4表達抑制前列腺癌細胞惡性生物學行為的實驗研究[D];華中科技大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杜文娟;晚期乳腺癌中拓撲異構(gòu)酶Ⅱα表達與蒽環(huán)類藥物療效的關(guān)系[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

2 陳東波;細針穿刺乳腺腫塊的傳統(tǒng)制片與液基制片的對比研究及測定ER、PR、HER-2的表達[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

3 龍浩;依達拉奉通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑對神經(jīng)細胞的保護機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2013年

4 浦龍健;siRNA沉默葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78增強人鼻咽癌細胞對順鉑及放療的敏感性[D];蚌埠醫(yī)學院;2013年

5 吳學標;PDIA6與腫瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性及分子機制的研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

6 趙超;以GRP78蛋白為靶向的胰蛋白酶抑制劑抗腸癌效應(yīng)研究[D];山西大學;2013年

7 付榮;自分泌型GRP78對腸癌細胞增殖影響及機制研究[D];山西大學;2013年

8 趙國宏;葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78在食管鱗癌轉(zhuǎn)移中的作用及機制的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

9 田靜;GRP78在卵巢癌順鉑耐藥中的作用及其調(diào)控機制的體外研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

10 鄧娟;MPP~+調(diào)節(jié)Trx-1、TRPC1和calpain1表達的分子機制研究[D];昆明理工大學;2013年

  本文關(guān)鍵詞：未折疊蛋白反應(yīng)在增強口腔鱗癌藥物治療敏感性中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：320319