發(fā)布時(shí)間：2017-04-16 08:27

  本文關(guān)鍵詞：SPATA5L1基因在KB細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的生物學(xué)意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究轉(zhuǎn)染SPATA5L1基因后人口腔上皮癌KB細(xì)胞株p EX-1-SPATA5L1-KB,以了解高表達(dá)SPATA5L1蛋白在上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程中的生物學(xué)作用。方法:免疫熒光法激光共聚焦顯微鏡觀察SPATA5L1在KB細(xì)胞中的定位,同時(shí)通過Western blot方法分別檢測(cè)KB細(xì)胞的核蛋白和漿蛋白,確定SPATA5L1在KB細(xì)胞中的表達(dá)和定位。Western blot方法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的p EX-1-SPATA5L1-KB中SPATA5L1蛋白表達(dá)量。采用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SPATA5L1對(duì)KB細(xì)胞侵襲能力的改變,掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化尤其是偽足的變化。利用CCK-8法及18F-FLT摻入法測(cè)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖能力,并與空轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)照。Western Blot法檢測(cè)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin等EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平,檢測(cè)與Wnt信號(hào)通路有關(guān)的幾個(gè)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:SPATA5L1在KB細(xì)胞中主要定位在細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞核中無表達(dá)。相比于空轉(zhuǎn)染細(xì)胞,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株p EX-1-SPATA5L1-KB中目的基因SPATA5L1具有高表達(dá),其侵襲能力明顯增加,且細(xì)胞形態(tài)由正多邊形變?yōu)榧忓N體形,并且細(xì)胞表面絲狀偽足明顯增長且數(shù)量增多,其細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。SPATA5L1在KB細(xì)胞中過表達(dá)能夠抑制上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá),并促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin的表達(dá)。Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白Dvl2、Dvl3、LRP6表達(dá)量顯著升高,Axin1的表達(dá)量顯著降低。結(jié)論:SPATA5L1基因編碼的蛋白在KB細(xì)胞中定位于細(xì)胞質(zhì)中。SPATA5L1過表達(dá)可以促進(jìn)口腔上皮癌細(xì)胞EMT的發(fā)生,增強(qiáng)其增殖和侵襲能力。SPATA5L1誘發(fā)KB細(xì)胞發(fā)生EMT的分子機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：KB細(xì)胞 SPATA5L1 EMT 腫瘤增殖 侵襲
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R730.55;R739.8
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-11
• 第一部分 SPATA5L1蛋白在KB細(xì)胞中的定位11-21
• 一、實(shí)驗(yàn)材料11-13
• 二、實(shí)驗(yàn)方法13-18
• 三、結(jié)果18-19
• 四、討論19-21
• 第二部分 SPATA5L1對(duì)KB細(xì)胞增殖能力和侵襲能力的影響21-32
• 一、實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 二、實(shí)驗(yàn)方法22-25
• 三、結(jié)果25-29
• 四、討論29-32
• 第三部分 SPATA5L1促進(jìn).腔上皮癌細(xì)胞EMT發(fā)生的確定及其分子機(jī)制32-42
• 一、實(shí)驗(yàn)材料32-34
• 二、實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 三、結(jié)果35-37
• 四、討論37-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 綜述：上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生及其生物標(biāo)志物50-71
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 攻讀碩士學(xué)位出版或公開發(fā)表的文章71-72
• 致謝72-74

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬飛;蔣軒;喻嶸;吳勇軍;;Wnt信號(hào)通路在糖尿病腎病研究中的作用探討[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2013年12期

  本文關(guān)鍵詞：SPATA5L1基因在KB細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的生物學(xué)意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：310436