本文關(guān)鍵詞：PITX2各亞型在調(diào)控人表皮干細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牙齒是由上皮和間充質(zhì)細(xì)胞相互誘導(dǎo)形成,其發(fā)育過(guò)程大致分為五個(gè)階段,分別是牙板期、蕾狀期、帽狀期、鐘狀期和分泌期,每個(gè)發(fā)育階段需要多個(gè)信號(hào)分子的相互作用和相互誘導(dǎo)。成體牙齒的不可再生性使得牙齒再生的研究工作具有重要的科研價(jià)值。牙齒的不可再生性主要體現(xiàn)在成體牙齒損壞后無(wú)法自行修復(fù),因此后期工作中也無(wú)法用成體牙齒的相關(guān)細(xì)胞進(jìn)行牙齒再生研究。而尋找間充質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞這個(gè)問(wèn)題已經(jīng)基本得到解決,因此我們的主要工作是找到一種可以替代外胚層來(lái)源的牙上皮細(xì)胞的干細(xì)胞,對(duì)于上皮來(lái)源的干細(xì)胞而言,成體干細(xì)胞相較于胚胎干細(xì)胞從取材上有相當(dāng)大的優(yōu)勢(shì)。目前已有研究表明,成體干細(xì)胞中的人表皮干細(xì)胞可以替代外胚層來(lái)源牙上皮細(xì)胞,人表皮干細(xì)胞加入外源蛋白FGF8與具有誘導(dǎo)功能的E13.5小鼠牙胚間充質(zhì)重組,移植裸鼠腎囊膜下培養(yǎng)20天,能夠形成嵌合體牙齒,經(jīng)鑒定后人表皮干細(xì)胞可以向成釉質(zhì)細(xì)胞方向分化,但是成牙成釉率較低,分析其原因可能是由于人表皮干細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化的一些關(guān)鍵因子的缺少。而PITX2基因在牙胚上皮細(xì)胞中強(qiáng)烈表達(dá),是牙上皮的標(biāo)志性基因之一,參與調(diào)控牙胚上皮細(xì)胞的分化；而且PITX2基因是FGF8的下游基因。本研究利用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)在人表皮十細(xì)胞中過(guò)表達(dá)PITX2基因,為提高誘導(dǎo)人表皮十細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化的效率奠定基礎(chǔ)。本研究首先鑒定PITX2三種亞型在人牙上皮中同時(shí)表達(dá),分別是PITX2a.PITX2b和PITX2c。其次,以人包皮為材料分離得到人表皮干細(xì)胞,并通過(guò)免疫組化技術(shù)鑒定人表皮干細(xì)胞相關(guān)表面抗原。然后分別構(gòu)建PITX2三種亞型的慢病毒載體,幾種亞型的慢病毒分別感染人表皮干細(xì)胞,為了保證感染效率,篩選有綠色熒光蛋白表達(dá)的人表皮干細(xì)胞單克隆細(xì)胞并擴(kuò)大培養(yǎng)。將過(guò)表達(dá)PITX2三種亞型的人表皮干細(xì)胞分別與E13.5小鼠牙胚問(wèn)充質(zhì)進(jìn)行重組,移植裸鼠腎囊膜下培養(yǎng)20天后,重組塊進(jìn)行脫水包埋處理后鑒定。利用HE和AZAN以及免疫組化技術(shù)鑒定,免疫組化技術(shù)檢測(cè)嵌合體牙齒中DSPP.Ameloblastin.Amelogenin表達(dá)情況。結(jié)果表明,成牙率和成釉率最高的一組是KSC(PITX2a)+E 13.5Mes重組,成牙率為64.3%,成釉率為88.9%。過(guò)表達(dá)PITX2a在人表皮干細(xì)胞,提高了其向成釉質(zhì)細(xì)胞方向分化效率。而PITX2b和PITX2c對(duì)于人表皮干細(xì)胞向牙上皮細(xì)胞分化作用不大,這也說(shuō)明PITX2基因中PITX2a這個(gè)亞型在調(diào)控牙胚上皮細(xì)胞的分化起主要作用。綜上所述,PITX2a這個(gè)亞型可能是定向誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞牙向分化的關(guān)鍵因子之一,對(duì)牙齒的發(fā)育是正調(diào)控的作用。該研究結(jié)果為牙齒再生的問(wèn)題提供了相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：牙齒再生 PITX2a 慢病毒 成釉質(zhì)細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R78
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-6
• 中文文摘6-11
• 緒論11-21
• 一、牙齒早期發(fā)育的過(guò)程和PITX2基因在人牙齒早期發(fā)育中的作用11-13
• 二、牙齒再生研究的概況和人表皮干細(xì)胞應(yīng)用于牙齒再生的研究現(xiàn)狀13-16
• 三、外源基因在細(xì)胞中表達(dá)16-18
• 四、研究目的和意義18-21
• 第一章 材料和方法21-37
• 1.1 材料21-23
• 1.1.1 取材21
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21
• 1.1.3 試劑21-22
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器22
• 1.1.5 試劑配制22-23
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法23-37
• 1.2.1 人表皮干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)方法23-25
• 1.2.2 慢病毒載體構(gòu)建、慢病毒的生產(chǎn)和感染人表皮干細(xì)胞25-32
• 1.2.3 人表皮干細(xì)胞中過(guò)表達(dá)PITX2及其三亞型成牙成釉統(tǒng)計(jì)和嵌合體形態(tài)32-37
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-51
• 2.1 人表皮干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定37-38
• 2.2 慢病毒感染人表皮干細(xì)胞38-45
• 2.2.1 慢病毒質(zhì)粒載體的構(gòu)建和鑒定38-41
• 2.2.2 慢病毒的生產(chǎn)41-43
• 2.2.3 慢病毒感染人表皮干細(xì)胞43-44
• 2.2.4 RT-PCR鑒定慢病毒感染人表皮干細(xì)胞中PITX2各亞型的表達(dá)44-45
• 2.3 過(guò)表達(dá)PITX2三亞型誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞牙向分化45-51
• 2.3.1 嵌合體成牙成釉率的統(tǒng)計(jì)45
• 2.3.2 嵌合體牙齒組織形態(tài)觀察和相關(guān)標(biāo)志物鑒定45-51
• 第三章 分析和討論51-59
• 3.1 人表皮干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定51
• 3.2 慢病毒感染人表皮干細(xì)胞51-53
• 3.3 過(guò)表達(dá)PITX2三亞型誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞牙向分化53-59
• 第四章 結(jié)論59-61
• 附錄161-63
• 附錄263-69
• 參考文獻(xiàn)69-77
• 攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果77-79
• 致謝79-81
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷81-83

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬慧群;馮捷;彭振輝;;人表皮干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2007年06期

2 江惟蘇;李鏡波;魏代奎;黎麗芬;胡萌;戴新民;;人表皮干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年17期

3 王秀卿;王志玲;劉會(huì)敏;;人表皮干細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)[J];白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年05期

4 田亞寧;周智輝;梁漫;董昌虎;何春玲;仝航斌;李宏;;人表皮干細(xì)胞的分離培養(yǎng)[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2013年30期

5 董蕊 ,金巖 ,劉源 ,聶鑫 ,王新文 ,趙宇;人表皮干細(xì)胞在不同培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察及其生物學(xué)性狀的初步探討[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2005年04期

6 謝曉繁;賈赤宇;陳璧;郝曉鳳;胡大海;韓軍濤;;端粒酶活性對(duì)人表皮干細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2006年13期

7 梅雪嶺;連石;;人表皮干細(xì)胞的分離與鑒定[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2011年06期

8 曾元臨;辛國(guó)華;邱澤亮;羅旭;余于榮;李國(guó)輝;;應(yīng)用Ⅳ型膠原黏附法進(jìn)行人表皮干細(xì)胞的體外快速分離與鑒定[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年20期

9 陳小波;程飚;劉宏偉;孫同柱;付小兵;;雌激素對(duì)人表皮干細(xì)胞增殖與遷移影響的體外實(shí)驗(yàn)[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2011年02期

10 任瓊芬,王軍琳;端粒酶在體外培養(yǎng)人表皮干細(xì)胞中的表達(dá)[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2005年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曾元臨;邱澤亮;辛國(guó)華;余于榮;羅旭;李國(guó)輝;;人表皮干細(xì)胞分離和培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[A];第四屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷感染救治新進(jìn)展論文匯編[C];2006年

2 謝曉繁;賈赤宇;陳璧;郝曉鳳;韓軍濤;;端粒酶活性對(duì)人表皮干細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第四屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷感染救治新進(jìn)展論文匯編[C];2006年

3 林才;羅旭;辛國(guó)華;黃來(lái)劍;邱澤亮;;利用Ⅳ型膠原和“陽(yáng)性雙抗”分離培養(yǎng)鑒定人表皮干細(xì)胞[A];第四屆華東六省一市整形外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2007年浙江省整形、美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 劉德伍;黃培信;毛遠(yuǎn)桂;陳劍平;藍(lán)蔚;王聯(lián)群;;不同發(fā)育階段人表皮干細(xì)胞端粒酶表達(dá)的比較研究[A];第八屆全國(guó)燒傷外科學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2007年

5 辛國(guó)華;曾元臨;羅旭;萬(wàn)子揚(yáng);;改良五黃油對(duì)體外人表皮干細(xì)胞生長(zhǎng)的影響[A];第八屆全國(guó)燒傷外科學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2007年

6 王黎;李紅文;吳景蘭;張晨陽(yáng);王一菱;丁一;;人表皮干細(xì)胞群體的分離及其生物學(xué)特性[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

7 王冰梅;葛香連;林程琳;宋穎楠;張彥定;;誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

8 王聯(lián)群;劉德伍;藍(lán)蔚;林尊文;黃培信;;端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因轉(zhuǎn)染人表皮干細(xì)胞的體外研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 韓為東;付小兵;;成人表皮干細(xì)胞可能具有多潛能性分化特征[A];第七屆全國(guó)創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會(huì)議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

10 藍(lán)蔚;劉德伍;毛遠(yuǎn)桂;;基因芯片技術(shù)篩選不同發(fā)育階段人表皮干細(xì)胞差異表達(dá)基因的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷外科學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王聯(lián)群;hTERT基因在人表皮干細(xì)胞中的表達(dá)與調(diào)控研究[D];南昌大學(xué);2010年

2 李元朝;Wnt-1的生物信息學(xué)分析及其對(duì)人表皮干細(xì)胞分化與增殖的影響的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉英;PITX2各亞型在調(diào)控人表皮干細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化的作用[D];福建師范大學(xué);2015年

2 邱澤亮;人表皮干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)的研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

3 項(xiàng)曉飛;阿片肽及其受體對(duì)離體人表皮干細(xì)胞增殖遷移的影響研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 李國(guó)芳;蛻皮甾酮促進(jìn)人表皮干細(xì)胞增殖的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

5 藍(lán)蔚;基因芯片技術(shù)篩選不同發(fā)育階段人表皮干細(xì)胞差異表達(dá)基因的研究[D];南昌大學(xué);2009年

6 黃培信;人表皮干細(xì)胞定位、分離培養(yǎng)與端粒酶表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2007年

7 李麗文;誘導(dǎo)人表皮干細(xì)胞牙向分化的研究[D];福建師范大學(xué);2008年

8 王黎;人表皮干細(xì)胞群體的分離方法及其生物學(xué)特性的研究[D];鄭州大學(xué);2006年

9 唐紅英;整合素β1對(duì)人表皮干細(xì)胞增殖與分化的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 郭銳;PKC-ζ活化在SDF-1趨化人表皮干細(xì)胞遷移中作用的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：PITX2各亞型在調(diào)控人表皮干細(xì)胞向成釉質(zhì)細(xì)胞分化的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：307739