目的:新型信號分子Nel-like molecule-l（Nell-1）是誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分化及骨形成的重要正調(diào)控因子,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)它在牙齒發(fā)育、牙髓細(xì)胞的分化及礦化過程中發(fā)揮了重要作用,但其具體分子機制尤其是有無胞內(nèi)蛋白的參與還不明確。檢索文獻和String數(shù)據(jù)庫分析蛋白之間的相互作用,已有文獻證實Apoptosis related protein 3（APR3）是Nell-1的直接結(jié)合蛋白,它在細(xì)胞凋亡、自噬、還有成骨細(xì)胞分化、礦化及骨形成過程中發(fā)揮重要作用。近期有研究表明Nell-1介導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化和礦化過程中有APR3的協(xié)同參與,起到重要正調(diào)控作用。由于成骨細(xì)胞與成牙本質(zhì)細(xì)胞在蛋白表達譜及胚胎來源上具有相似性,本課題組對Nell-1介導(dǎo)的牙髓細(xì)胞分化和礦化過程中是否有APR3參與進行了探討并對其信號路徑機制進行了分析。方法:本課題首先利用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測了體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞內(nèi)Nell-1和APR3的表達,通過細(xì)胞免疫熒光雙染技術(shù)檢測了 Nell-1和APR3在人牙髓細(xì)胞的亞細(xì)胞分布和共定位情況;利用免疫共沉淀技術(shù)和Wester... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?Ａ．網(wǎng)絡(luò)統(tǒng)計數(shù)據(jù)

?山東大學(xué)博士學(xué)位論文???結(jié)果??１．人牙髄細(xì)胞分離和培養(yǎng)??采用改良組織塊法進行體外人牙髓細(xì)胞培養(yǎng)，取材１２瓶，有６瓶在７天左??右顯微鏡下觀察到有２－５個細(xì)胞爬出組織塊邊緣，培養(yǎng)細(xì)胞用組織塊法成功率約??為５０％。爬出的細(xì)胞呈貼壁式生長，開始細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大多數(shù)短梭形，偶見??多邊形。細(xì)胞核位于胞體中央，呈圓形、橢圓形，核仁清晰。分裂期胞內(nèi)可見??１－４個細(xì)胞核。隨著培養(yǎng)，傳代細(xì)胞形態(tài)變成細(xì)長梭形，細(xì)胞排列趨于規(guī)律，可??呈束狀，平行狀等，一般可見２－４個胞漿突。傳５代后細(xì)胞形態(tài)保持良好，與原??代細(xì)胞相比形態(tài)更規(guī)則。??

代細(xì)胞相比形態(tài)更規(guī)則。??ＩＥ?Ｈ??圖１－１?ｈＤＰＣｓ原代細(xì)胞（１０〇ｘ）?圖ｌ－２ｈＤＰＣｓ原代細(xì)胞（２０〇ｘ）??圖１－３第２代ｈＤＰＣｓ細(xì)胞（２０〇ｘ）?圖１－４第６代ｈＤＰＣｓ細(xì)胞（２０〇ｘ）??１８??


本文編號：2912750