目的:觀察Wnt/β-catenin通路的抑制因子DKK1（Dickkopf-1）在牙囊細(xì)胞中的表達(dá),探究在牙囊細(xì)胞成骨分化誘導(dǎo)和成熟成骨細(xì)胞的形成中DKK1的特異性表達(dá)機(jī)制,探討其與牙齒萌出和頜骨生長(zhǎng)發(fā)育的相關(guān)性。方法:采用酶消化法分離培養(yǎng)牙囊細(xì)胞并純化細(xì)胞。將純化牙囊細(xì)胞分為兩組,對(duì)照組:普通α-MEM培養(yǎng)基培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組:α-MEM+成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)。分別培養(yǎng)5d后,ALP染色鑒定成骨細(xì)胞的骨形成情況,采用免疫細(xì)胞化學(xué)法分組觀察DKK1的表達(dá)分布;分別培養(yǎng)10d、20d后采用Western Blot分組檢測(cè)DKK1、β-catenin、Runx2的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:鏡下顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞ALP染色呈陽(yáng)性,免疫組織化學(xué)顯示DKK1在實(shí)驗(yàn)組表達(dá)較對(duì)照組減弱;Western Blot檢測(cè)結(jié)果示實(shí)驗(yàn)組Wnt通路的關(guān)鍵因子DKK1條帶蛋白表達(dá)下調(diào),β-catenin蛋白及成骨相關(guān)蛋白R(shí)unx2的表達(dá)上調(diào),培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組區(qū)別隨之變化明顯。結(jié)論:Wnt通路抑制劑DKK1在牙囊細(xì)胞中有表達(dá)且受成骨分化影響,體現(xiàn)Wnt/β-catenin通路中DKK1的抑制作用,研究結(jié)果將為牙齒萌出和頜骨生... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

純化牙囊細(xì)胞形態(tài)為梭形或三角形×50

圖 2 堿性磷酸酶染色Fig.2Alkaline phosphatase staining 免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察 DKK1 表達(dá)成骨誘導(dǎo)組干預(yù) 5d 后，根據(jù)有無(wú)表達(dá)和染色深淺程度判定 DKK1 在牙囊細(xì)胞表達(dá)，分為陰性、弱陽(yáng)性、陽(yáng)性，陰性表達(dá)為無(wú)特殊顏色染色，弱陽(yáng)性表現(xiàn)為淺

分為陰性、弱陽(yáng)性、陽(yáng)性，陰性表達(dá)為無(wú)特殊顏色染色，弱陽(yáng)性表現(xiàn)為淺色或淺棕色，陽(yáng)性染色表現(xiàn)為深黃或棕褐色為。觀察對(duì)照組 DKK1 在牙囊細(xì)胞中表達(dá)呈棕褐色(圖 3a)，實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)呈淺棕色(圖 3b),陰性空白組未見(jiàn)黃色或棕褐特殊染色顆粒(圖 3c)。成骨干預(yù)后 DKK1 在牙囊細(xì)胞中表達(dá)隨時(shí)間增加而減少，明骨抑制因子 DKK1 與成骨細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓上清液和血清DKK1表達(dá)水平及其臨床意義[J]. 陳雙,張正昊,張敏,郝建萍.  中華全科醫(yī)學(xué). 2017(09)
[2]2581名兒童乳牙萌出情況的橫斷面研究[J]. 李瑞香,胡燕.  中華兒科雜志. 2017 (01)
[3]牙囊干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的體外研究[J]. 汪晨,徐燕,楊洋,孟明理,王敬,周永敏,王曉靜.  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2016(08)
[4]無(wú)翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員5A/受體酪氨酸激酶樣孤兒受體2在大鼠牙囊細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[J]. 王麗萍,李伯琦,王琪,鐵曉敏,劉奕杉.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2016(04)
[5]miR-92b-3p促進(jìn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化[J]. 張燕,嚴(yán)冰浩,徐辰,顧道蘭,王越,劉厚奇.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2016(05)
[6]MicroRNA在難治性癲癇診斷中的研究進(jìn)展[J]. 王小峰,尹劍.  中華神經(jīng)外科雜志. 2016 (03)
[7]經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在牙周膜細(xì)胞成骨分化過(guò)程中的調(diào)控[J]. 廖海清,曹正國(guó).  口腔醫(yī)學(xué)研究. 2016(03)
[8]雙向差速法純化大鼠牙囊細(xì)胞[J]. 王麗萍,李伯琦,鐵曉敏,王琪,劉奕杉.  口腔疾病防治. 2016(03)
[9]經(jīng)典Wnt信號(hào)通路對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)作用[J]. 徐偉麗,牛玲玲,王文俠,崔鵬舉.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2016(03)
[10]DKK1-siRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠治療作用的研究[J]. 劉媛,劇錦哲,張偉,龐春艷,武劍,呂鳳鳳,王永福.  中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志. 2015(02)



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