干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞，它包括胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。目前已經(jīng)成功分離培養(yǎng)包括來(lái)自骨髓、肌肉、神經(jīng)、上皮等組織的成體干細(xì)胞。牙髓干細(xì)胞是位于牙髓組織的一種成體干細(xì)胞。2000年，Gronthos等首先成功地分離培養(yǎng)出人牙髓干細(xì)胞，為干細(xì)胞的研究開辟了一個(gè)新的領(lǐng)域。牙髓干細(xì)胞具有同其他成體干細(xì)胞相似的生物學(xué)特性，具有較強(qiáng)的克隆形成能力，可以分化為牙髓組織中的終末功能細(xì)胞并具有一定的橫向分化能力。目前國(guó)內(nèi)外只有人牙髓干細(xì)胞培養(yǎng)成功的報(bào)道，鼠牙髓干細(xì)胞的相關(guān)研究國(guó)內(nèi)外還未見報(bào)道，而鼠是實(shí)驗(yàn)研究最常用的模型，它具有取材容易、與人同源性較高等優(yōu)點(diǎn)，因此本研究以大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用細(xì)胞克隆分離培養(yǎng)方式進(jìn)行大鼠牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)，同時(shí)對(duì)大鼠牙髓干細(xì)胞進(jìn)行了一系列生物學(xué)特性研究，為牙髓干細(xì)胞的研究增加了新的內(nèi)容，為牙齒再生的研究奠定基礎(chǔ)。 第一部分：大鼠牙髓干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定 本部分實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞克隆分離培養(yǎng)的方式，對(duì)大鼠牙髓細(xì)胞進(jìn)行克隆篩選，將獲得的單細(xì)胞克隆來(lái)源的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化及體內(nèi)接種實(shí)驗(yàn)，結(jié)果共獲得4株單細(xì)胞克隆來(lái)源細(xì)胞株(282、6A11、8A1、8A7)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

礦化液誘導(dǎo)組RT.PCR產(chǎn)物凝膠電泳圖

7Y染色體Sry基因檢測(cè)鑒定來(lái)源:移植物基因組DNA經(jīng)PcR擴(kuò)增后，出現(xiàn)272飾大小擴(kuò)增產(chǎn)物條帶，與預(yù)期設(shè)計(jì)吻合，內(nèi)參照壓actin出現(xiàn)618bp亮條帶(圖1.3.9)。日一actins叮marker圖1.3.9大鼠sry基因RT一PCR檢測(cè)3討論本研究采用細(xì)胞裸鼠體內(nèi)種植和體外細(xì)胞誘導(dǎo)的鑒定方法，復(fù)蘇后的細(xì)胞在經(jīng)過(guò)礦化液誘導(dǎo)后，部分細(xì)胞可出現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)的單個(gè)胞漿突起，與成牙本質(zhì)細(xì)胞胞漿突起相似。成牙本質(zhì)細(xì)胞是形成牙本質(zhì)的前體細(xì)胞，目前對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞的研究較多I‘7，’8}，學(xué)者們主要利用牙乳頭細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)來(lái)獲得成牙本質(zhì)細(xì)胞，然而用于誘導(dǎo)的多為TGF-p、QFGF、IGF一1等價(jià)格昂貴的細(xì)胞因子I’9一“’1，本研究采用礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)液對(duì)牙髓干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，同樣獲得成牙本質(zhì)細(xì)胞樣細(xì)胞。牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentinsial。Ph。Sphopr。tein

大小的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶，與設(shè)計(jì)PPARg片段大小吻合，脂肪組織對(duì)照結(jié)果出現(xiàn)同樣大小條帶，內(nèi)參照GA衛(wèi)DH(299如)條帶清晰，未誘導(dǎo)組細(xì)胞無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物(圖3.2.2)。6人pOH胭腳組叭祝鉀質(zhì)m目生份行導(dǎo)盯圖3.2.2大鼠牙位千細(xì)胞脂肪系誘導(dǎo)PCR電泳結(jié)果2.2神經(jīng)細(xì)胞系誘導(dǎo)結(jié)果:經(jīng)誘導(dǎo)后大鼠牙翻千細(xì)胞RT.PCR產(chǎn)物凝膠電泳，未見預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物條帶，對(duì)照組出現(xiàn)403飾大小條帶，與設(shè)計(jì)p一肌球蛋白重鏈基因片段大小吻合，內(nèi)參照GA衛(wèi)DH(299飾)條帶清晰，未誘導(dǎo)組細(xì)胞同樣無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物條帶(圖3.2.3)。

【參考文獻(xiàn)】：
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