1、成牙骨質細胞的培養(yǎng)目的:建立成牙骨質細胞系,觀察細胞生長,測試細胞體外礦化能力,檢測細胞內ETBR的存在。方法:培養(yǎng)小鼠源性成牙骨質細胞系OCCM-30,觀察其生長狀態(tài),繪制生長曲線,茜素紅染色檢測其體外礦化能力,免疫熒光染色檢測細胞內ETBR的表達及定位。結果:生長曲線結果示細胞生長迅速,茜素紅染色結果示OCCM-30體外誘導可生成礦化結節(jié),免疫熒光結果顯示成牙骨質細胞膜上存在ETBR。結論:OCCM-30細胞具有體外礦化潛能,細胞內存在ETBR。2、內皮素B受體激動劑對成牙骨質細胞增殖、凋亡和ALP的影響目的:探討ETBR激動劑對OCCM-30細胞增殖,凋亡和ALP的影響。方法:采用濃度為10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的ETBR激動劑作為實驗組,0 mol/L ETBR激動劑為對照組,MTT法檢測成牙骨質細胞增殖變化;流式細胞儀檢測凋亡的轉變;堿性磷酸酶染色法檢測成牙骨質細胞活性的轉變。結果:MTT和堿性磷酸酶染色顯示,ETBR激動劑抑制細胞增殖和細胞活性,并在一定范圍內表現(xiàn)出劑量依賴性;流式結果分析顯示ETBR激動劑促進細胞早期凋亡,對晚期凋亡無明顯影響。結論:ETBR激動劑以濃度依賴方式抑制成牙骨質細胞增殖和ALP表達,并促進細胞早期凋亡。3、內皮素B受體激動劑對成牙骨質細胞分化的影響目的:檢測10-9mol/L的ETBR激動劑對OCCM-30細胞體外礦化、分化的影響。方法:茜素紅染色檢測細胞體外礦化;real-time PCR法檢測分化相關基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和Coll mRNA相對表達情況;Western blot法檢測Runx2和Osterix表達情況。結果:茜素紅染色示,ETBR激動劑抑制細胞體外礦化;real-time PCR結果示,Runx2、Bsp、Osterix、Ocn和CollmRNA的表達水平均有不同程度的下調;Western blot示Runx2和Osterix表達下調。結論:10-9mol/L的ETBR激動劑可通過下調分化相關基因Runx2、Bsp、Osterix、Ocn、Coll mRNA表達和減少分化相關蛋白Runx2、Osterix的相對表達水平,抑制OCCM-30細胞體外礦化和分化。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

圖２．１成牙骨質細胞形態(tài)（ｘｉ〇）??Ｆｉｇ２．１?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｃｅｍｅｎｔｏｂｌａｓｔｓ?（ｘ?１〇）??

?２．３．３免疫熒光染色??如圖２．３所示，經免疫熒光染色，成牙骨質細胞內可見內皮素Ｂ??受體的陽性，主要分布在細胞膜和胞漿。??ｍ??圖２．３?ＥＴＢＲ免疫熒光染色（ｘｌ〇）??Ｆｉｇ．２．３?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｆｏｒ?ＥＴＢＲ?（ｘ?１０）??２．３．４成牙骨質細胞的礦化誘導??細胞礦化誘導過程，細胞融合８０％以上，開始復層生長，細胞增??殖速度降低，開始進行分化，誘導７ｄ時，即可在顯微鏡下觀察到礦??化結節(jié)，隨誘導時間延長，礦化結節(jié)數(shù)目增加，體積增大，ｌ〇ｄ時礦??化結節(jié)明顯。圖２．４為誘導１２ｄ，對照組鏡下可見零星散布的紅染小??結節(jié)，誘導組鏡下可見遍及皿底的紅染礦化結節(jié)。??？?？?．．?．??

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本文編號：2889796