本文關(guān)鍵詞：miR-23a和miR-30a對炎性環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第四軍醫(yī)大學(xué)》 2013年

miR-23a和miR-30a對炎性環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究

楊博  

【摘要】：牙周炎是危害最廣泛的慢性炎性骨吸收性疾病。目前，臨床上治療牙周病的常用方法是基礎(chǔ)治療、藥物治療及手術(shù)治療等，但均難以獲得理想的牙周骨組織再生修復(fù)。骨代謝平衡是由成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞協(xié)同完成的。在炎性環(huán)境下，成骨細(xì)胞功能受抑是骨代謝失衡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有大量研究證實(shí)炎癥因子可通過不同信號通路調(diào)控成骨細(xì)胞分化，而miRNA的發(fā)現(xiàn)使研究目光著眼于轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。miRNA是一類進(jìn)化上高度保守的長度約22nt的內(nèi)源性小分子RNA，參與轉(zhuǎn)錄后水平的基因調(diào)控。它與很多生命過程和某些疾病的發(fā)生發(fā)展均有緊密聯(lián)系。 目前研究認(rèn)為某些miRNA的表達(dá)改變與牙周炎的發(fā)生相關(guān)。此外，成骨細(xì)胞的分化過程也與miRNA有關(guān)。然而到目前為止，國內(nèi)外學(xué)者的研究只是停留于發(fā)現(xiàn)和報道參與調(diào)控牙周炎疾病發(fā)生發(fā)展的特定miRNA分子群；以及調(diào)控骨分化成熟的特定miRNA分子群。但對共同調(diào)節(jié)著牙周炎和骨分化的分子：miR-23a和miR-30a，以及它們對炎性微環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控作用和對牙周炎性骨缺失發(fā)生機(jī)制的研究尚未見報道�；谝陨涎芯勘尘埃狙芯客ㄟ^建立大鼠牙周炎動物模型及LPS刺激成骨細(xì)胞模擬體外炎性微環(huán)境，，探討在炎性環(huán)境中，miR-23a和miR-30a對骨吸收和成骨細(xì)胞功能的影響。繼而通過體外干預(yù)miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平，我們檢測了它們在正常和炎癥環(huán)境下對成骨細(xì)胞的成骨能力和炎癥因子受體表達(dá)的影響。對這些分子的研究，有助于更加深入的了解牙周炎性骨缺失的分子機(jī)制，為臨床治療牙周炎骨缺失提供新的策略。 研究目的 （1）觀察研究大鼠牙周炎模型炎性牙齦、骨組織中miR-23a、-30a的表達(dá)改變，并模擬體外炎性微環(huán)境，觀察炎性環(huán)境下牙周膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞內(nèi)miR-23a、-30a的表達(dá)情況。 （2）探討miR-23a、-30a對成骨細(xì)胞的分化及細(xì)胞炎性因子受體表達(dá)的影響。 （3）探討在炎性環(huán)境下，改變miR-23a、-30a的表達(dá)對成骨細(xì)胞的分化及細(xì)胞表面炎性因子受體表達(dá)的影響。 研究方法 （1）采用金屬絲結(jié)扎法建立大鼠牙周炎動物模型，結(jié)扎21天后處死動物收集結(jié)扎側(cè)和對照側(cè)牙齦及牙槽骨組織；以1μg/ml LPS刺激牙周膜細(xì)胞和成骨細(xì)胞以模擬炎性環(huán)境，利用Real-time PCR檢測組織、細(xì)胞內(nèi)miR-23a、-30a的表達(dá)。 （2）通過體外轉(zhuǎn)染miR-23a、-30a的模擬物和抑制物，實(shí)現(xiàn)miR-23a、-30a的過表達(dá)和低表達(dá)。用ALP染色、Real-time PCR檢測成骨細(xì)胞分化能力和炎性因子的表達(dá)水平。 （3）在存在LPS的環(huán)境下，體外抑制miR-23a、-30a的表達(dá)，Real-time PCR檢測miR-23a、-30a對成骨相關(guān)基因和炎性因子的表達(dá)水平的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （1）大鼠牙周炎牙齦組織、牙槽骨組織中miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平明顯高于正常對照側(cè)。牙周膜細(xì)胞、成骨細(xì)胞經(jīng)1μg/mL LPS刺激24h后，miR-23a和miR-30a的表達(dá)水平均較對照組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 （2）過表達(dá)miR-23a和miR-30a后，ALP染色、Real-time PCR檢測成骨相關(guān)基因表達(dá)下降而炎性因子的表達(dá)升高。相反，抑制miR-23a和miR-30a的表達(dá)后，ALP染色、Real-time PCR檢測成骨相關(guān)基因表達(dá)上升而炎性因子的表達(dá)下降。 （3） LPS刺激成骨細(xì)胞后，成骨分化能力受抑制而炎性因子表達(dá)升高。在LPS刺激環(huán)境下，抑制miR-23a和miR-30a的表達(dá)，礦化基因表達(dá)上升、炎性因子表達(dá)下降。 結(jié)論 （1） miR-23a和miR-30a參與調(diào)控炎性微環(huán)境下骨代謝和成骨細(xì)胞的生物學(xué)活性。 （2） miR-23a和miR-30a抑制成骨細(xì)胞骨向分化，促進(jìn)炎性因子的表達(dá)。 （3）在炎性環(huán)境下，抑制miR-23a和miR-30a的表達(dá)，可恢復(fù)成骨細(xì)胞分化能力、抑制炎性因子的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R781.42
【目錄】：

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10 鐘超;去抗原異種松質(zhì)骨與兔成骨細(xì)胞組織相容性的實(shí)驗(yàn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：miR-23a和miR-30a對炎性環(huán)境下成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：183038