本文關(guān)鍵詞：云南白藥對人牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《昆明醫(yī)科大學(xué)》 2015年

云南白藥對人牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

殷欣桐  

【摘要】：[目的]體外分離培養(yǎng)獲得人牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs),與云南白藥復(fù)合于HA/TCP (hydroxyapatite/tricalcium phosphate)支架上,將復(fù)合體植入裸鼠體內(nèi),研究云南白藥對hDPSCs在體內(nèi)成牙本質(zhì)向分化的影響,為云南白藥應(yīng)用于牙髓組織修復(fù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]體外分離培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞(human dental pulp cells, hDPCs),取原代或第1代hDPCs,單克隆化培養(yǎng)獲得hDPSCs,通過流式細(xì)胞儀檢測hDPSCs表面特異性抗原標(biāo)志物并進(jìn)行成骨及成脂誘導(dǎo)鑒定其干細(xì)胞特性。將hDPSCs與HA/TCP進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng)后分為3組,云南白藥組加入含10μg/ml云南白藥的10%FBS的α-MEM培養(yǎng)液,陽性對照組加入含100ng/ml的重組人骨形成蛋白-2(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2, rhBMP-2)的10%FBS的α-MEM培養(yǎng)液,空白對照組加入含10%FBS的α-MEM培養(yǎng)液。體外復(fù)合培養(yǎng)1周后植入裸鼠背部皮下,8周后取出復(fù)合物,采用HE染色觀察組織學(xué)形態(tài)的變化,免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry, IHC)檢測成牙本質(zhì)相關(guān)的特異性蛋白骨鈣素(Osteocalcin,OC)、牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的蛋白表達(dá)情況,qRT-PCR檢測成牙本質(zhì)相關(guān)的特異性蛋白OC、DSPP的基因表達(dá)情況,觀察動(dòng)物體內(nèi)條件下云南白藥對HA/TCP支架上培養(yǎng)的hDPSCs向成牙本質(zhì)分化的影響,并對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。[結(jié)果]1、單克隆純化培養(yǎng)獲得的hDPSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物STRO-1、CD146、CD29、CD105呈陽性表達(dá),CD34, CD45呈陰性表達(dá)；經(jīng)成骨誘導(dǎo)有礦化結(jié)節(jié)形成,成脂誘導(dǎo)有脂滴形成。2、植入動(dòng)物體內(nèi)的復(fù)合物經(jīng)HE染色組織學(xué)觀察可見支架表面及孔隙內(nèi)有新生基質(zhì)樣物質(zhì)、成牙本質(zhì)樣細(xì)胞和微血管形成,云南白藥組與陽性對照組均較空白對照組明顯；未見牙髓牙本質(zhì)復(fù)合體形成；支架有部分的降解。3、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示云南白藥組與陽性對照組OC、DSPP為陽性表達(dá),空白對照組為陰性表達(dá)；OC的表達(dá)量云南白藥組低于陽性對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),云南白藥組與陽性對照組均高于空白對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); DSPP的表達(dá)量云南白藥組與陽性對照組均高于空白對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),云南白藥組與陽性對照組之間無明顯差異(P0.05)。4、qRT-PCR結(jié)果顯示：OC的表達(dá)量云南白藥組高于空白對照組與陽性對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05); DSPP的表達(dá)量云南白藥組與陽性對照組均高于空白對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),云南白藥組與陽性對照組之間無明顯差異(P0.05)。[結(jié)論]1、本實(shí)驗(yàn)通過克隆化培養(yǎng)所獲得細(xì)胞為hDPSCs,具有成骨、成脂向分化能力。2、10μg/ml的云南白藥對植入動(dòng)物體內(nèi)的hDPSCs-HA/TCP復(fù)合物有誘導(dǎo)hDPSCs成牙本質(zhì)向分化的作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R781
【目錄】：

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【參考文獻(xiàn)】

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