本文關(guān)鍵詞：熒光素酶基因標(biāo)記的舌鱗癌細胞構(gòu)建及其裸鼠活體成像的觀察研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《天津醫(yī)科大學(xué)》 2014年

熒光素酶基因標(biāo)記的舌鱗癌細胞構(gòu)建及其裸鼠活體成像的觀察研究

王通  

【摘要】：研究目的：1、通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法構(gòu)建穩(wěn)定表達熒光素酶和綠色熒光蛋白的舌鱗癌單克隆細胞株Tca83-GFP-luc,證實其生長特性及細胞活性與母細胞系Tca83無顯著差異,為后期裸鼠活體生物發(fā)光成像提供細胞學(xué)基礎(chǔ)。 2、建立可重復(fù)性、穩(wěn)定性的Tca83-GFP-luc舌鱗癌裸鼠舌體原位及皮下異位移植瘤模型,應(yīng)用小動物活體成像技術(shù)無創(chuàng)、實時和連續(xù)觀察舌鱗癌動物模型的生長、轉(zhuǎn)移,為腫瘤動物模型的推廣應(yīng)用、臨床舌癌的預(yù)防及治療提供參考依據(jù)。 研究方法：1、采用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,將帶有熒光素酶基因和GFP基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到人舌鱗癌Tca83細胞株,G418篩選后獲得穩(wěn)定表達熒光素酶基因的單克隆細胞(Tca83-GFP-luc),以MTT法、流式細胞技術(shù)以及Westernblot檢測Tca83-GFP-luc細胞的生物學(xué)特性,用流式細胞儀及活體成像儀體外檢測’Tca83-GFP-luc細胞中熒光素酶的表達水平。 2、裸鼠舌癌皮下異位模型的建立：20只裸鼠隨機分為兩組,實驗組15只,于后肢皮下注射Tca83-GFP-luc細胞懸液,對照組5只,于后肢皮下注射Tca83細胞懸液,從而建立舌鱗癌皮下異位移植瘤模型,以活體成像儀連續(xù)觀察裸鼠后肢皮下4w,記錄腫瘤生物發(fā)光影像,檢測熒光信號值,測定腫瘤大小,統(tǒng)計腫瘤大小與熒光信號值的關(guān)系。4w后處死實驗裸鼠,離體觀察移植瘤組織切片。 3、裸鼠舌癌正位模型的建立：20只裸鼠隨機分為兩組,實驗組15只,于左側(cè)舌緣注射Tca83-GFP-luc細胞懸液,對照組5只,于左側(cè)舌緣注射Tca83細胞懸液,建立舌鱗癌正位移植瘤模型,以活體成像儀連續(xù)觀察裸鼠舌體4w,記錄腫瘤發(fā)光影像,檢測熒光信號值,測定腫瘤大小,統(tǒng)計腫瘤大小與熒光信號值的關(guān)系。4w后處死實驗裸鼠,離體觀察移植瘤組織切片。 研究結(jié)果：1、通過脂質(zhì)體2000介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染法,熒光素酶基因和綠色熒光蛋白基因可被轉(zhuǎn)染入Tca83細胞,經(jīng)體外G418篩選,可獲得熒光素酶基因穩(wěn)定高效表達的單克隆細胞Tca83-GFP-luc, MTT法、流式細胞技術(shù)以及Westernblot檢測Tca83-GFP-luc細胞生物學(xué)特性與Tca83細胞無顯著差異。用流式細胞儀對獲得的Tca83-GFP-luc細胞進行檢測,其熒光素酶表達率達96%,以活體成像儀檢測Tca83-GFP-luc細胞體外發(fā)光強度與細胞濃度數(shù)量成線性關(guān)系(r2=0.9510，P0.01)。 2、11只異位模型實驗組裸鼠在接種后7-11d出現(xiàn)后肢皮下腫瘤,成瘤率73.33%,4只異位模型對照組裸鼠在接種后7-9d出現(xiàn)后肢皮下腫瘤,成瘤率80%,13只正位模型實驗組裸鼠在接種后第6-12d相繼出現(xiàn)舌部腫瘤,成瘤率86.67%,3只正位模型對照組裸鼠在接種后第6-10d相繼出現(xiàn)舌部腫瘤,成瘤率60%。 3、利用活體成像儀連續(xù)觀察異位模型實驗組裸鼠4w,第1w可檢測到腫瘤細胞的生物發(fā)光信號,隨著時間延長,熒光信號逐漸增強,統(tǒng)計分析腫瘤體積大小與熒光信號呈線性相關(guān)(r2=0.9872,P0.01)。 4、利用活體成像儀連續(xù)觀察正位實驗組裸鼠4w,第1w可檢測到腫瘤細胞的生物發(fā)光信號,隨著時間延長,熒光信號逐漸增強,統(tǒng)計分析腫瘤體積大小與熒光信號呈線性相關(guān)(r2=0.9809,P0.01)。 5、熒光顯微鏡下觀察舌體正位及皮下異位移植瘤組織切片,腫瘤細胞胞漿內(nèi)可見GFP發(fā)出的綠色熒光。 研究結(jié)論：1、利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Tca83細胞,經(jīng)G418梯度篩選成功建立穩(wěn)定表達熒光素酶的舌鱗癌單克隆細胞株Tca83-GFP-luc,該單克隆細胞可應(yīng)用于小動物活體生物發(fā)光成像。 2、通過建立裸鼠舌癌異位移植瘤模型,并利用活體生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀察模型發(fā)光情況,證實熒光素酶表達活性隨腫瘤體積的增長而增強。通過建立裸鼠舌癌正位移植瘤模型,并利用活體生物發(fā)光成像系統(tǒng)直觀、連續(xù)、敏感地檢測腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況,為研究在體內(nèi)環(huán)境中舌癌的變化發(fā)展規(guī)律提供了重要的實驗手段,為下一步監(jiān)測裸鼠舌癌移植瘤對藥物作用的變化情況,從而為分析藥物對腫瘤的治療效果提供理想的實驗動物檢測平臺。因此,采用活體動物成像系統(tǒng)構(gòu)建的帶熒光素酶基因的裸鼠舌癌移植瘤模型是拓展舌癌體內(nèi)生長、轉(zhuǎn)移及治療相關(guān)研究的理想模型。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.86
【目錄】：

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