目的:探討在阿爾茨海默病(Alzheimer’s diseases,AD)細胞模型中miR-124-3p通過調(diào)控Caveolin-1的表達對細胞凋亡率及鈣離子濃度的影響。方法:體外培養(yǎng)野生型N2a(N2a/WT)和N2a/APPswe細胞,real-time PCR及Western blot分別檢測miR-124-3p與β-淀粉樣蛋白前體蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)m RNA及蛋白的表達。雙熒光素酶報告實驗分析miR-124-3p與Caveolin-1之間靶向調(diào)控關(guān)系。N2a/APPswe細胞瞬時轉(zhuǎn)染miR-124-3p模擬物(mimics),real-time PCR、Western blot分別檢測Caveolin-1 m RNA和蛋白的表達。N2a/APPswe細胞分別瞬時轉(zhuǎn)染miR-124-3p模擬物(mimics)、pc DNA-Caveolin-1、Caveolin-1-si RNA,流式細胞儀分析細胞凋亡水平,測定細胞內(nèi)游離鈣離子濃度。結(jié)果:與WT組相比,APPswe組APP m RNA和蛋白水平表達都明顯升高(分別為P=0.00...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗細胞
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細胞分組
        1.2.2 細胞培養(yǎng)
        1.2.3 脂質(zhì)體介導(dǎo)細胞轉(zhuǎn)染
        1.2.4 雙熒光素酶報告實驗
        1.2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        1.2.6 細胞鈣離子濃度測定
        1.2.7 real-time PCR檢測mi R-124-3p、Caveolin-1的表達
        1.2.8 Western blot檢測APP、Caveolin-1表達
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 利用生物學(xué)軟件進行靶基因預(yù)測
    2.2 N2a/APPswe細胞中APP以及mi R-124-3p表達的變化
    2.3 mi R-124-3p對Caveolin-1 3’UTR具有靶向調(diào)控作用
    2.4 mi R-124-3p對Caveolin-1 m RNA及蛋白表達的影響
    2.5 mi R-124-3p對細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    2.6 過表達Caveolin-1對細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
    2.7 干擾Caveolin-1表達對細胞凋亡率、細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
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本文編號：3993610