目的：探討外源Aβ，及大腦病理性增加Aβ（AD模擬）對(duì)核受體RXRα、Nur77的表達(dá)和亞細(xì)胞定位的影響，RXRα、Nur77表達(dá)和亞細(xì)胞定位對(duì)神經(jīng)元凋亡的影響。 方法：以用Aβ25-35和ddH2O分別處理的N2a細(xì)胞，AD小鼠與對(duì)照小鼠的大腦皮層和海馬為研究對(duì)象。PCR結(jié)合免疫組化方法鑒定AD小鼠是否模擬成功。首先，在基因水平上應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR方法檢測(cè)N2a細(xì)胞和皮層、海馬中RXRα、Nur77的mRNA表達(dá)水平。第二，在蛋白含量水平上應(yīng)用核質(zhì)分離結(jié)合蛋白印記方法檢測(cè)RXRα、Nur77蛋白總含量以及在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中的含量。第三，在蛋白定位上應(yīng)用免疫熒光對(duì)細(xì)胞爬片和大腦冰凍組織切片進(jìn)行定位染色，觀察N2a細(xì)胞與皮層、海馬細(xì)胞中RXRα、Nur77的亞細(xì)胞定位；最后，細(xì)胞凋亡的檢測(cè)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)N2a細(xì)胞凋亡情況，DAPI染色觀察皮層、海馬細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果：N2a細(xì)胞經(jīng)Aβ處理24h后，RXRαmRNA表達(dá)水平增加了16.47%，Nur77mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯變化；RXRα、Nur77總蛋白量變化無(wú)明顯差異，但RXRα、Nur77在細(xì)胞質(zhì)中的含量與分布增多，RXRα與...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2大腦皮層與海馬免疫組化染色結(jié)果

圖2大腦皮層與海馬免疫組化染色結(jié)果熒光定量PCR檢測(cè)RXRα/Nur77的mRNA轉(zhuǎn)錄水平熒光RT-PCR方法檢測(cè)Aβ25-35短肽處理后的N2a細(xì)胞，AD馬組織中RXRα與Nur77基因表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示，A的N2a細(xì)胞對(duì)比于未處....

圖3熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)A：細(xì)胞RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)；B：大腦皮層組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)；C：海馬組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)

23圖3熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)A：細(xì)胞RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲：大腦皮層組織RXRα、Nur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)；C：海馬組織Rur77與GAPDH基因熒光PCR擴(kuò)增曲線(xiàn)。AB

圖4引物對(duì)的溶解曲線(xiàn)A：RXRα溶解曲線(xiàn)B：Nur77溶解曲線(xiàn)C：GAPDH溶解曲線(xiàn)

圖4引物對(duì)的溶解曲線(xiàn)A：RXRα溶解曲線(xiàn)B：Nur77溶解曲線(xiàn)C：GAPDH溶解曲線(xiàn)3.4RXRα與Nur77蛋白的WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用WesternBlotting實(shí)驗(yàn)方法對(duì)N2a細(xì)胞和Aβ25-35處理的N2a細(xì)胞....

圖5RXRα與Nur77蛋白的總蛋白含量A：N2a細(xì)胞Aβ25-35(-)與N2a細(xì)胞

海馬的增加了2.58%，Nur77蛋白含量增加了3.53%，蛋白含量無(wú)明顯變化，據(jù)單樣本t檢驗(yàn)得出P>0.05，統(tǒng)計(jì)差別無(wú)意義。如圖6所示。AB

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