發(fā)布時間：2023-05-07 07:24

　　阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一種比較常見的衰老相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,目前尚無特異的治療和診斷方法。AD的主要病理特征是細(xì)胞外淀粉樣肽(amyloidβ-peptide, Ap)沉積形成老年斑(senile plaque, SP)、細(xì)胞內(nèi)tau蛋白積聚形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangle, NFT)以及神經(jīng)元丟失及腦萎縮。目前認(rèn)為,Aβ異常折疊和聚集是其神經(jīng)元損傷作用的主要始動環(huán)節(jié),形成的Aβ寡聚體主要以C端肽為核心,而將N端肽暴露于表面。研究表明,針對Aβ不同肽段的單抗在AD治療和早期診斷中具有各自的優(yōu)勢,而針對AβN端的單抗通常親和力較高,比較適合用于AD的診斷和治療研究。 本課題主要研究了具有N端表位的抗Aβ單抗體外細(xì)胞保護(hù)作用以及此類抗體在AD檢測中的初步應(yīng)用。 一、針對N端表位的抗Aβ單克隆抗體的體外保護(hù)作用 首先,選擇反式視黃酸(Trans Retinoic Acid, TRA)作為分化誘導(dǎo)劑,用可溶性Aβ寡聚體引起神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞損傷,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),并用MTT法測定細(xì)胞活力,建立較穩(wěn)...

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
2 抗Aβ N端表位單抗的體外保護(hù)作用
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料與儀器
        2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化
        2.1.3 Aβ寡聚體的細(xì)胞毒性實驗
        2.1.4 抗Aβ單抗體外細(xì)胞保護(hù)實驗
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 反式視黃酸(TRA)誘導(dǎo)時間的確定
        2.2.2 Aβ寡聚體的細(xì)胞毒性具有劑量依賴性
        2.2.3 針對N端表位的抗Aβ單抗體外細(xì)胞保護(hù)實驗
3 抗AβN端表位單抗在Aβ檢測中的初步應(yīng)用
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 實驗材料與儀器
        3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        3.1.3 3株抗體的大量制備與純化
        3.1.4 用生物素標(biāo)記抗Aβ抗體
        3.1.5 檢測生物素標(biāo)記抗體的靈敏度
        3.1.6 確定包被抗體與檢測抗體的最佳工作濃度
        3.1.7 比較不同包被抗體對反應(yīng)系統(tǒng)的影響
        3.1.8 Aβ42寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品檢測系統(tǒng)工作曲線的建立
        3.1.9 測定AD患者血漿Aβ的含量
    3.2 實驗結(jié)果
        3.2.1 Aβ寡聚體制備的效果
        3.2.2 純化后單克隆抗體的純度檢測
        3.2.3 生物素標(biāo)記抗體復(fù)合物制備效果
        3.2.4 生物素標(biāo)記對檢測抗體靈敏度的影響
        3.2.5 用棋盤滴定法確定包被抗體與捕獲抗體的最佳工作濃度
        3.2.6 Aβ42寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品檢測系統(tǒng)工作曲線的建立及靈敏度檢測
        3.2.7 比較不同包被抗體對檢測系統(tǒng)的影響
        3.2.8 測定AD患者血漿中Aβ的含量
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A
中英文縮略詞表
作者簡歷
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3810549