大量研究表明,氧化應(yīng)激是神經(jīng)退行性疾病阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的一個(gè)顯著的病理特征。神經(jīng)退變?cè)诔擞邢到y(tǒng)的氧化應(yīng)激的表現(xiàn)外,在生物化學(xué)和神經(jīng)病理水平,這些疾病的神經(jīng)退變與脂質(zhì)、核酸和蛋白的氧化損傷的標(biāo)志物共存。鑒于氧化應(yīng)激的病理影響,針對(duì)抗氧化損傷的治療方法成為了治療阿爾茨海默病等神經(jīng)退行性疾病的靶標(biāo)。 氧化應(yīng)激(Oxidative stress, OS)與AD的發(fā)病密切相關(guān)。AD的病理特征之一為由beta-淀粉樣蛋白(β-amyloid, Aβ)沉積形成的老年斑。AD發(fā)病機(jī)制的“Aβ學(xué)說(shuō)”認(rèn)為Aβ在特定腦區(qū)的聚集,介導(dǎo)氧化OS損傷,OS在AD的發(fā)生和進(jìn)展中發(fā)揮主要的作用,AD患者腦中存在廣泛的OS。Aβ可以在體內(nèi)和體外誘導(dǎo)OS。最近研究顯示,氧化應(yīng)激促進(jìn)Aβ的產(chǎn)生和聚集,反過(guò)來(lái)Aβ又誘導(dǎo)氧化應(yīng)激,OS從而進(jìn)一步增加Aβ的產(chǎn)生,如此在OS和Aβ之間形成惡性循環(huán),促進(jìn)AD的發(fā)生。因此,一項(xiàng)具有廣泛前景的預(yù)防和治療AD的方法為減弱或抑制Aβ誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷。同時(shí)一些天然抗氧化劑,如石杉?jí)A甲(Huperzine A),姜黃(Curcumin),銀杏(G...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Astaxanthin通過(guò)ERK1/2通路上調(diào)HO-1的表達(dá)抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性損傷
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 主要藥品及試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 有關(guān)溶液的配制
        2. 方法
            2.1. SH-SY5Y細(xì)胞的培養(yǎng)以及處理
            2.2. 纖維狀A(yù)β_25-35的制備
            2.3. 細(xì)胞活力MTT檢測(cè)
            2.4. 細(xì)胞凋亡檢測(cè):Hoechst染色
            2.5. 細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定
            2.6. 線粒體膜電位的測(cè)定
            2.7. Western Blot免疫印跡
            2.8. Stripping for reprobing western blots
            2.9. 統(tǒng)計(jì)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1. 蝦青素改善Aβ_25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷
        3.2. 蝦青素阻止Aβ_25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的發(fā)生
        3.3. 蝦青素抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷
        3.4. 蝦青素抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的線粒體膜電位的降低
        3.5. 蝦青素上調(diào)Bcl-2/Bax的表達(dá)水平比例
        3.6. 蝦青素抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的MAPKs的激活
        3.7. 蝦青素誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)
        3.8. Aβ_25-35誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)
        3.9. 蝦青素通過(guò)上調(diào)HO-1表達(dá)來(lái)抑制Aβ_25-35介導(dǎo)的細(xì)胞毒性
        3.10. ERK1/2參與蝦青素誘導(dǎo)的HO-1表達(dá)
        3.11. ERK1/2抑制劑逆轉(zhuǎn)蝦青素抑制Aβ_25-35神經(jīng)毒性損傷的保護(hù)作用
    小結(jié)
第二部分 麥角甾苷通過(guò)ERK1/2和P13K/Akt上調(diào)Nrf2依賴的HO-1表達(dá)抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性
    材料與方法
        1. 材料
            1.1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2. 主要藥品及試劑
            1.3 主要儀器
            1.4. 有關(guān)溶液的配制
        2. 方法
            2.1. SH-SY5Y細(xì)胞的培養(yǎng)以及處理
            2.2. 纖維狀A(yù)β_25-35的制備
            2.3. 細(xì)胞活力MTT檢測(cè)
            2.4. 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.5. Calcein染色
            2.6. 細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定
            2.7. 線粒體膜電位的測(cè)定
            2.8. 冰凍腦組織切片的制備
            2.9. 蛋白的免疫組織化學(xué)染色
            2.10. PC12細(xì)胞免疫熒光
            2.11. 胞漿和胞核蛋白的提取
            2.12. Western Blot免疫印跡
            2.13. 統(tǒng)計(jì)分析
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1. 麥角甾苷抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷
        3.2. 麥角甾苷抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的凋亡
        3.3. 麥角甾苷抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷
        3.4. 麥角甾苷逆轉(zhuǎn)Aβ_25-35誘導(dǎo)的線粒體膜電位的降低
        3.5. 麥角甾苷對(duì)凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)水平的影響
        3.6. 麥角甾苷抑制Aβ_25-35誘導(dǎo)的細(xì)胞色素c的釋放
        3.7. 麥角甾苷抑制Aβ_25-35引起的Caspase-3的激活
        3.8. 麥角甾苷誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)
        3.9. 麥角甾苷激活Nrf2
        3.10. 麥角甾苷通過(guò)ERK和PI3K/Akt激活Nrf2
        3.11. 麥角甾苷通過(guò)ERK和PI3K/Akt上調(diào)HO-1的表達(dá)
        3.12. 麥角甾苷通過(guò)上調(diào)HO-1的表達(dá)抑制Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性損傷
    小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
博士期間完成的其他工作
附錄
致謝



本文編號(hào)：3789309