干細(xì)胞因子(stem cell factor, SCF)結(jié)合受體酪氨酸激酶c-Kit后,可轉(zhuǎn)導(dǎo)多條信號通路。它們介導(dǎo)細(xì)胞增殖、存活、分化、遷移、黏附和化學(xué)趨向等一系列生物過程。龐大數(shù)目的突變動物模型及其相關(guān)研究表明SCF/c-Kit對黑色素細(xì)胞生成、造血作用、配子發(fā)生、以及肥大細(xì)胞和Cajal細(xì)胞的發(fā)育是至關(guān)重要的。雖然早在一百年前就建立了第一個c-Kit突變小鼠品系,直到今天關(guān)于c-Kit分子和生理功能的報(bào)道仍在快速增長。 在本論文中,通過ENU化學(xué)誘變,我們得到并鑒定了一個原癌基因c-Kit新的點(diǎn)突變小鼠品系:c-KitV922G突變小鼠,在c-Kit激酶區(qū)發(fā)生V922G錯義突變。大體上講,該品系雜合突變小鼠表現(xiàn)為色素沉積缺陷、盲腸增大,且外周血淋巴細(xì)胞數(shù)和肥大細(xì)胞數(shù)有減少的趨勢,純合突變小鼠胚胎期致死。 我們還鑒定了一個轉(zhuǎn)錄因子Pax3基因上的新的點(diǎn)突變小鼠品系:Splotch³⁶⁴⁶突變小鼠,在Pax3基因的第6號外顯子上有一個錯義突變A894G,造成同源結(jié)構(gòu)域HD的N272D突變,同時(shí)還發(fā)現(xiàn)在第7號外顯子上有一個同義突變C1154T。該品系雜合突變小鼠表...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文中常用縮寫列表
第一章 研究背景介紹
    第一節(jié) 乙�；鶃喯趸�
        1.1.1 ENU 誘變原理
        1.1.2 誘變及篩查手段
        1.1.3 突變基因的定位及克隆
    第二節(jié) Stem cell factor (SCF) / c-Kit 信號通路
        1.2.1 W 和Sl 基因座
            1.2.1.1 W 基因座(W/c-kit locus)
            1.2.1.2 Steel 基因座(Stem cell factor, steel still underway)
        1.2.2 SCF/c-Kit 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
            1.2.2.1 SCF 和c-Kit 的結(jié)構(gòu)及特征
            1.2.2.2 通過 c-Kit 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
    第三節(jié) c-Kit 相關(guān)突變的人類疾病及動物模型
        1.3.1 功能缺失型突變
        1.3.2 功能獲得性突變
        1.3.3 c-Kit的不適當(dāng)表達(dá)
    第四節(jié) 人類的隱形殺手——抑郁癥
        1.4.1 抑郁癥概述
        1.4.2 抑郁癥類型
        1.4.3 抑郁癥的癥狀
        1.4.4 抑郁癥對人們生活的影響
        1.4.5 抑郁癥成因
            1.4.5.1 概述
            1.4.5.2 抑郁癥產(chǎn)生的生物因素
    第五節(jié) 關(guān)聯(lián)分析
        1.5.1 人類基因組標(biāo)記和遺傳圖譜
        1.5.2 單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記簡介
            1.5.2.1 SNP 概述
            1.5.2.2 SNP 的應(yīng)用
        1.5.3 關(guān)聯(lián)分析
            1.5.3.1 Case-Control分析
            1.5.3.2 傳遞不平衡檢驗(yàn)
    參考文獻(xiàn)
第二章 兩種白斑小鼠突變基因的染色體定位
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動物與設(shè)施
        2.2.2 組織學(xué)分析
        2.2.3 外周血常規(guī)分析
        2.2.4 突變位點(diǎn)定位及克隆
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 G1M1007品系小鼠表型
        2.3.2 G1M1007小鼠突變位點(diǎn)位于W/c-Kit基因
        2.3.3 解剖分析c-Kit^V922G/+雜合突變小鼠表型缺陷
        2.3.4 睪丸和脾臟未發(fā)現(xiàn)異常
        2.3.5 G1M3646 品系小鼠表型
        2.3.6 G1M3646 小鼠突變位點(diǎn)位于Pax3 基因
    第四節(jié) 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 SCF/c-Kit 信號與抑郁癥
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動物與設(shè)施
        3.2.2 海馬蛋白提取及檢測
        3.2.3 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測
        3.2.4 血清及血漿的制備
        3.2.5 外周血激素水平檢測
        3.2.6 小鼠行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
            3.2.6.1 開放場實(shí)驗(yàn)
            3.2.6.2 明暗箱穿梭
            3.2.6.3 高架十字迷宮
            3.2.6.4 強(qiáng)迫游泳
            3.2.6.5 懸尾實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 腦組織冰凍切片
        3.2.8 免疫熒光
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 c-Kit^V922G突變體外表達(dá)量下降
        3.3.2 c-Kit^V922G/+雜合子小鼠海馬區(qū)c-Kit 蛋白表達(dá)量及磷酸化水平下降
        3.3.3 c-Kit^V922G/+雜合子小鼠有類似抑郁癥(depression-like)行為表型
        3.3.4 生理指標(biāo)測定
        3.3.5 c-KitV922G/+雜合子成年小鼠海馬齒狀回 SGZ 區(qū)可見新生神經(jīng)元增殖與分化的推遲
    第四節(jié) 討論
    參考文獻(xiàn)
第四章 c-Kit 與DISC1 基因上的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與抑郁癥的關(guān)聯(lián)分析
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料與方法
        4.2.1 研究對象
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.2.1 DNA 提取
            4.2.2.2 測序反應(yīng)
            4.2.2.3 Taqman分型技術(shù)
            4.2.2.4 熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)
            4.2.2.5 引物設(shè)計(jì)
            4.2.2.6 數(shù)據(jù)分析
    第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 c-Kit 與抑郁癥的關(guān)聯(lián)分析
        4.3.2 DISC1 基因與雙向情感障礙的關(guān)聯(lián)分析
    第四節(jié) 討論
        4.4.1 人類的W/c-Kit 基因座與抑郁癥相關(guān)聯(lián)
        4.4.2 DISC1 基因與雙向情感障礙的關(guān)聯(lián)分析
        4.4.3 c-Kit 與DISC1 之間可能存在一定的聯(lián)系
    參考文獻(xiàn)
第五章 總結(jié)與展望
    參考文獻(xiàn)
結(jié)語
致謝
附錄一 外周血激素水平檢測方法
附錄二 攻讀博士期間論文情況



本文編號：3771954