本研究采用原代細胞培養(yǎng)技術(shù)，以神經(jīng)毒素β-淀粉樣肽(Aβ_1-42)誘導小鼠原代大腦皮層神經(jīng)細胞損傷，構(gòu)建老年性癡呆細胞模型，分析梓醇對老年性癡呆神經(jīng)細胞的保護作用及其作用機制。 利用Aβ_1-42誘導小鼠原代大腦皮層純神經(jīng)元凋亡，探討梓醇對小鼠大腦皮層神經(jīng)元的保護作用機制。大腦皮層純神經(jīng)元細胞經(jīng)梓醇預孵育30min再和Aβ_1-42作用72h后，檢測梓醇對皮層神經(jīng)元形態(tài)變化、caspase級聯(lián)通路以及線粒體功能的調(diào)節(jié)作用。檢測結(jié)果顯示梓醇改善了損傷的細胞形態(tài)，有效減少了乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，抑制了caspase-3及乙酰膽堿酯酶(AChE)活性的提高，減弱了細胞內(nèi)鈣離子超載、活性氧自由基(ROS)產(chǎn)生和線粒體膜電位的喪失，保護了線粒體功能免受損傷。這些結(jié)果表明，梓醇可能通過阻斷caspase級聯(lián)通路的激活，以及改善線粒體功能障礙而降低Aβ_1-42對神經(jīng)元產(chǎn)生的毒性損傷。 利用Aβ_1-42誘導小鼠原代大腦皮層神經(jīng)-膠質(zhì)混合細胞，造成皮層神經(jīng)元炎癥損傷，探討梓醇的抗炎癥保護作用機...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 老年性癡呆與細胞凋亡
        1.1.1 細胞凋亡的特征
        1.1.2 caspase及AChE在細胞凋亡過程中的作用
        1.1.3 線粒體與細胞凋亡
    1.2 膠質(zhì)細胞的激活在AD形成過程中的作用
        1.2.1 小膠質(zhì)細胞和星型膠質(zhì)細胞的特性
        1.2.2 AD中神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活的病理及對神經(jīng)元細胞的損傷
    1.3 老年性癡呆動物模型的研究進展
        1.3.1 神經(jīng)毒素Aβ在AD中毒性作用的發(fā)揮機制
        1.3.2 幾種常用的AD動物模型
    1.4 針對老年性癡呆癥的藥物治療現(xiàn)狀
    1.5 本論文的選題依據(jù)及研究內(nèi)容
    參考文獻
2 梓醇對原代大腦皮層神經(jīng)元細胞凋亡的保護作用研究
    2.1 實驗材料及設(shè)備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞培養(yǎng)
        2.2.2 免疫細胞化學染色
        2.2.3 Aβ_1-42對小鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞的損傷作用
        2.2.4 Aβ_1-42介導小鼠大腦皮層神經(jīng)元細胞損傷后LDH的釋放
        2.2.5 caspase-3活性分析
        2.2.6 乙酰膽堿酯酶(ACHE)活性分析
        2.2.7 細胞內(nèi)鈣離子的測定
        2.2.8 細胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)的測定
        2.2.9 細胞線粒體膜電位的測定
        2.2.10 統(tǒng)計學分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 Aβ_1-42對大腦皮層神經(jīng)元細胞活力的影響
        2.3.2 梓醇對Aβ_1-42致大腦皮層神經(jīng)元細胞內(nèi)LDH漏出的影響
        2.3.3 梓醇對Aβ_1-42介導的大腦皮層神經(jīng)元細胞損傷的保護作用
        2.3.4 梓醇對Aβ_1-42誘導皮層神經(jīng)元凋亡時caspase-3和AChE活力的影響
        2.3.5 梓醇調(diào)節(jié)了Aβ_1-42介導的大腦皮層神經(jīng)元細胞內(nèi)Ca²⁺失衡
        2.3.6 梓醇抑制了Aβ_1-42誘導的大腦皮層神經(jīng)元細胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生
        2.3.7 梓醇改善了Aβ_1-42導致的大腦皮層神經(jīng)元線粒體膜電位降低
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    參考文獻
3 梓醇對Aβ_1-42介導的大腦皮層神經(jīng)元炎癥損傷的保護作用研究
    3.1 實驗材料及設(shè)備
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 小鼠原代大腦皮層神經(jīng)-膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
        3.2.2 純小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
        3.2.3 純星型膠質(zhì)細胞培養(yǎng)
        3.2.4 免疫染色
        3.2.5 乳酸脫氫酶(LDH)的測定
        3.2.6 小膠質(zhì)細胞中活性氧自由基的測定
        3.2.7 酶聯(lián)免疫法檢測小膠質(zhì)細胞中腫瘤壞死因子(TNF-α)的釋放
        3.2.8 星型膠質(zhì)細胞中一氧化氮的(nitric oxide,NO)的測定
        3.2.9 星型膠質(zhì)細胞中誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的測定
        3.2.10 統(tǒng)計學分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 皮層神經(jīng)-膠質(zhì)細胞體系中梓醇對Aβ_1-42介導的神經(jīng)元損傷的保護作用
        3.3.2 梓醇對Aβ_1-42介導的小膠質(zhì)細胞激活的抑制作用
        3.3.3 梓醇抑制激活的小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生炎癥因子
        3.3.4 梓醇抑制星型膠質(zhì)細胞的激活
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
    參考文獻
結(jié)論
攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文情況
致謝



本文編號：3755775