發(fā)布時(shí)間：2022-10-30 14:23

　　阿片類物質(zhì)（如嗎啡、海洛因等）具有強(qiáng)大的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，但極易產(chǎn)生耐受和依賴，而且戒斷癥狀非常嚴(yán)重，這不僅極大地限制了其臨床應(yīng)用，而且其濫用和依賴也嚴(yán)重危害社會(huì)安定。本研究的目的在于探討嗎啡耐受依賴的細(xì)胞分子機(jī)制，以求在眾多環(huán)節(jié)中為阿片類物質(zhì)耐受依賴的防治尋找新的突破。為此，建立小鼠嗎啡耐受依賴動(dòng)物模型及SH-SY5Y神經(jīng)細(xì)胞類嗎啡依賴樣細(xì)胞模型。從細(xì)胞信息傳遞入手，觀察嗎啡耐受依賴動(dòng)物小腦、紋狀體、海馬及大腦皮層及SH-SY5Y細(xì)胞中一些信使物質(zhì)、蛋白激酶PKA及PKC活性變化及其對信息傳導(dǎo)通路中的一些關(guān)鍵酶AC、NOS、sGC、PDE等酶的活性及轉(zhuǎn)錄因子c-Fos的磷酸化調(diào)節(jié)，研究嗎啡耐受依賴中的蛋白磷酸化機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)的主要結(jié)果如下： 1．小鼠嗎啡耐受依賴模型的建立：小鼠每日遞增劑量皮下注射（s．c．）嗎啡7天，給藥至第4天嗎啡鎮(zhèn)痛作用已不明顯；末次給藥后2h，s．c．注射納洛酮可誘發(fā)小鼠戒斷癥狀，跳躍反應(yīng)發(fā)生率達(dá)100％，體重明顯下降，出現(xiàn)腹瀉、瞼下垂、雙后肢站立、自發(fā)活動(dòng)增加等。表明遞增給藥可建立小鼠嗎啡耐受依賴模型。 2．... 

【文章頁數(shù)】：124 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
    3 主要儀器及設(shè)備
實(shí)驗(yàn)方法
    1 小鼠腦室埋管及藥物引入
    2 小鼠嗎啡耐受依賴動(dòng)物模型的建立
        2.1 嗎啡的給藥方式
        2.2 光輻射熱甩尾潛伏期測定(TFL)
        2.3 納洛酮誘發(fā)戒斷癥狀的觀察
    3 人成神經(jīng)瘤細(xì)胞SH-SY5Y嗎啡依賴樣模型的建立
        3.1 SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)及分化
        3.2 嗎啡作用不同時(shí)間及納洛酮激發(fā)后cAMP水平的測定
    4 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織及SH-SY5Y細(xì)胞cAMP含量測定
        4.1 cAMP提取
        4.2 cAMP含量測定
        4.3 cAMP含量計(jì)算
    5 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織AC活性的測定
        5.1 AC提取
        5.2 AC活性測定
    6 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織cGMP含量測定
        6.1 cGMP提取
        6.2 cGMP含量測定
        6.3 cGMP含量計(jì)算
    7 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織sGC活性測定
        7.1 sGC提取
        7.2 sGC活性測定
    8 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織PDE活性測定
        8.1 PDE樣品制備
        8.2 PDE活性測定
    9 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織cNOS和iNOS活性測定
        9.1 NOS樣品制備
        9.2 NOS活性測定
        9.3 NOS活性計(jì)算
    10 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織磷酸肌醇含量測定
        10.1 腦組織~3H-肌醇的摻入及磷酸肌醇(IP、IP_2、IP_3)含量測定
        10.2 磷酸肌醇含量計(jì)算
    11 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織及SH-SY5Y細(xì)胞PKA活性測定
        11.1 PKA樣品制備
        11.2 PKA活性測定
        11.3 PKA活性計(jì)算
    12 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織及SH-SY5Y細(xì)胞PKC活性測定
        12.1 PKC樣品制備
        12.2 PKC活性測定
        12.3 PKC活性計(jì)算
    13 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織AC、sGC、PDE、NOS反磷酸化測定
        13.1 磷酸化反應(yīng)
        13.2 SDS-PAGE及放射自顯影分析
    14 嗎啡依賴樣SH-SY5Y細(xì)胞c-Fos磷酸化測定
        14.1 細(xì)胞c-Fos ~(32)P放射性標(biāo)記
        14.2 細(xì)胞裂解
        14.3 抗原-抗體復(fù)合物形成
        14.4 靶蛋白c-Fos的免疫沉淀
        14.5 免疫沉淀物中放射性標(biāo)記蛋白SDS-PAGE及放射自顯影分析
    15 蛋白質(zhì)濃度測定
    16 數(shù)據(jù)處理
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1 小鼠嗎啡耐受依賴模型的建立
        1.1 小鼠對嗎啡鎮(zhèn)痛效應(yīng)的耐受
        1.2 小鼠形成嗎啡依賴過程中體重的變化及納洛酮誘發(fā)嗎啡依賴小鼠的戒斷反應(yīng)
    2 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織cAMP、cGMP、磷酸肌醇(IP、IP_2、IP_3)含量的變化
        2.1 cAMP含量變化
        2.2 cGMP含量變化及NOS抑制劑對其影響
        2.3 磷酸肌醇含量變化
    3 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織PKA及PKC活性變化及PKA、PKC抑制劑對小鼠嗎啡耐受依賴形成的影響
    4 i.c.v.PKA及PKC抑制劑、NOS抑制劑腦組織病理形態(tài)學(xué)檢查
    5 PKA、PKC對嗎啡耐受依賴小鼠腦組織AC活性的磷酸化調(diào)節(jié)
        5.1 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織AC活性的變化及PKA、PKC抑制劑對其影響
        5.2 PKA對AC的磷酸化作用
    6 PKA、PKC對嗎啡耐受依賴小鼠腦組織sGC活性的磷酸化調(diào)節(jié)
        6.1 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織sGC活性的變化及PKA、PKC抑制劑對其影響
        6.2 PKA對sGC的磷酸化作用
    7 PKA、PKC對嗎啡耐受依賴小鼠腦組織NOS活性的磷酸化調(diào)節(jié)
        7.1 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織NOS活性的變化及PKA、PKC抑制劑對其影響
        7.2 PKA對NOS的磷酸化作用
    8 PKA、PKC對嗎啡耐受依賴小鼠腦組織PDE活性的磷酸化調(diào)節(jié)
        8.1 嗎啡耐受依賴小鼠腦組織PDE活性的變化及PKA、PKC抑制劑對其影響
        8.2 PKA對PDE的磷酸化作用
    9 嗎啡依賴樣SH-SY5Y細(xì)胞模型的建立及納洛酮誘發(fā)的類阿片戒斷現(xiàn)象
    10 SH-SY5Y細(xì)胞形成阿片依賴樣過程中PKA、PKC活性變化
    11 PKA、PKC對嗎啡依賴樣SH-SY5Y細(xì)胞c-Fos磷酸化的調(diào)節(jié)
討論
    1 嗎啡耐受依賴的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?br>    2 阿片受體耦聯(lián)的第二信使系統(tǒng)的適應(yīng)性變化與嗎啡耐受依賴
    3 胞內(nèi)信使調(diào)節(jié)的蛋白激酶PKA及PKC與嗎啡耐受依賴
    4 嗎啡耐受依賴的蛋白磷酸化機(jī)制
    5 以蛋白磷酸化為中心的多種信號系統(tǒng)的相互作用與嗎啡耐受依賴
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 蛋白磷酸化與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]嗎啡長時(shí)程作用對小鼠腦組織蛋白激酶A及C活性的影響[J]. 方芳，陳軼琨，王小明，劉景生.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 1997(02)
[2]正常與腎性高血壓大鼠不同血管平滑肌磷酸肌醇含量的研究[J]. 周立平，路濤，文允鎰，黃文欣，張淑芳，陳孟勤.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 1995(01)
[3]阿片和阿片樣物質(zhì)耐受及成癮的生化基礎(chǔ)[J]. 李思嘉,湯健,韓濟(jì)生.  生理科學(xué). 1982(03)



本文編號：3699055