本文關鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動力學變化及左旋丁基苯肽的干預作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：隨著人口數量的增長和人均壽命的延長，腦血管病的發(fā)病率逐年上升，致使血管性癡呆(vascular dementia，VD)的發(fā)病率在世界范圍內亦呈持續(xù)上升趨勢。中國作為腦卒中發(fā)病率最高的國家，VD患者數量急劇攀升，由此造成的社會負擔、經濟負擔及家庭負擔十分沉重，從而倍受醫(yī)學界關注。 海馬神經元與學習、記憶密切相關。海馬神經元對缺血、缺氧異常敏感，在海馬神經元的損傷過程中，可能通過干擾線粒體動力學平衡導致能量代謝障礙，并通過多種途徑加速細胞死亡。線粒體動力學（mtochondrialdnamics）是指線粒體處于不斷分裂(fission)與融合(fusion)的動態(tài)過程。其中，線粒體融合蛋白1（mitofusin1，Mfn1）和線粒體融合蛋白2（mitofusin2，Mfn2）主要調控外膜融合，線粒體分裂蛋白1(mitochondrial fissionprotein1，Fis1)參與線粒體分裂。研究發(fā)現，，線粒體動力學失衡在多種神經系統(tǒng)疾病中扮演著重要角色，但其在VD發(fā)病機制中的作用尚未明確。本研究通過對上述線粒體融合分裂蛋白在VD小鼠海馬組織中的表達情況進行檢測，并觀察左旋丁基苯酞(l-3-n-butylphathlide, l-NBP)對線粒體動力學變化的干預作用，以期為深入研究VD發(fā)病機制，探索藥物治療新導向提供依據。 方法：以清潔級健康雄性C57Bl/6小鼠（體重22-26g，年齡8-10w）為研究對象，采用反復三次結扎雙側頸總動脈的方法，給予腦缺血20min(ischemia, I)-再灌注10min(reperfusion, R)處理，建立VD小鼠模型。實驗共分5組：假手術對照組、VD模型組、預防給藥組（l-NBP30mg/kg）、低劑量治療組（l-NBP30mg/kg）和高劑量治療組（l-NBP60mg/kg）。其中，預防組于術前連續(xù)給藥7d，治療組于術后連續(xù)給藥28d，并給予模型組玉米油灌胃作為藥物溶劑對照。（1）術后第29d-35d，利用Morris水迷宮試驗對各組小鼠進行學習、記憶能力測試；（2）行為學測試完畢后，HE染色觀察海馬組織病理學變化；（3）應用實時熒光定量反轉錄PCR（real-time FQ RT-PCR）檢測小鼠海馬組織Mfn1、Mfn2和Fis1mRNA水平的變化，應用免疫蛋白印跡法（Western-blot）檢測海馬組織Mfn1、Mfn2和Fis1蛋白表達的變化。 結果： 1Morris水迷宮試驗 1.1術后第29-34d，定位航行實驗測試各組小鼠學習成績，結果顯示： 與假手術組相比，VD模型組尋臺潛伏期明顯延長(P0.05)；與VD模型組相比，預防組和高劑量治療組尋臺潛伏期明顯縮短(P0.05)，而低劑量治療組縮短不明顯。 1.2術后第35d，空間探索實驗測試各組小鼠記憶成績，結果顯示： 與假手術組相比，模型組平臺象限滯留時間百分比明顯減少(P0.05)；與模型組相比，預防組和高劑量治療組滯留時間百分比明顯延長(P0.05)，低劑量治療組滯留時間無明顯延長。 2各組小鼠海馬組織HE染色觀察 假手術組海馬CA1區(qū)錐體細胞排列整齊、致密，胞漿清亮，胞核飽滿，核仁清晰；其余各組小鼠海馬CA1區(qū)均可見片段性錐體細胞缺失，以VD模型組最為顯著，低劑量治療組次之，相比之下，預防組和高劑量治療組錐體細胞排列較為整齊，核固縮現象較少。 3PCR顯示海馬組織Mfn1、Mfn2、Fis1mRNA水平的變化情況 3.1Mfn1/2mRNA水平的變化情況： 與假手術組相比，模型組Mfn1/2mRNA水平增高(P0.05)；與模型組相比，預防組和高劑量治療組Mfn1/2mRNA水平均降低(P0.05)，低劑量治療組Mfn1/2mRNA水平仍較高。 3.2Fis1mRNA水平的變化情況： 與假手術組相比，模型組Fis1mRNA水平減少(P0.05)；與模型組相比，預防組和高劑量治療組Fis1mRNA水平均增高(P0.05)，低劑量治療組Fis1mRNA水平仍較低。 4Western-blot顯示海馬組織Mfn1、Mfn2、Fis1蛋白的表達情況 4.1Mfn1/2蛋白的表達情況： 與假手術組相比，模型組Mfn1/2蛋白表達增高(P0.05)；與模型組相比，預防組和高劑量治療組Mfn1/2蛋白表達均降低(P0.05)，低劑量治療組Mfn1/2蛋白仍處于高表達水平。 4.2Fis1蛋白的表達情況： 與假手術組相比，模型組Fis1蛋白表達降低(P0.05)；與模型組相比，預防組和高劑量治療組Fis1蛋白表達均增高(P0.05)，低劑量治療組Fis1蛋白仍處于低表達水平。 結論： 1本研究成功建立了VD小鼠模型，小鼠海馬組織可見明顯的組織病理學改變，經Morris水迷宮試驗證實了小鼠存在學習和記憶功能障礙。提示本模型能基本模擬臨床上VD患者的認知功能障礙，是較理想的VD動物模型。 2在VD小鼠中，海馬組織神經元減少的同時，線粒體融合相關蛋白Mfn1、Mfn2的表達明顯增多，線粒體分裂相關蛋白Fis1的表達明顯降低。提示反復腦缺血再灌注刺激能打破海馬神經元原有的線粒體動力學的平衡態(tài)，而線粒體動力學機制的失衡可能與海馬神經元的損傷密切相關。 3在l-NBP干預作用下，小鼠的空間學習記憶功能和線粒體動力學失衡可在一定程度上得以改善，提示其神經保護作用可能與調控線粒體平衡有關。
【關鍵詞】：血管性癡呆 海馬 認知功能 線粒體動力學 左旋丁基苯酞
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R749.13;R965
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 引言12-15
• 第一部分 血管性癡呆小鼠模型的建立及海馬組織病理學改變15-26
• 前言15
• 材料與方法15-18
• 結果18-20
• 附圖20-22
• 討論22-23
• 小結23-24
• 參考文獻24-26
• 第二部分 左旋丁基苯酞對血管性癡呆小鼠學習記憶損害的干預作用26-34
• 前言26
• 材料與方法26-27
• 結果27-29
• 附圖29-32
• 討論32
• 小結32-33
• 參考文獻33-34
• 第三部分 左旋丁基苯酞對血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動力學影響34-56
• 前言34
• 材料與方法34-44
• 結果44-45
• 附圖45-51
• 附表51-52
• 討論52-53
• 小結53-54
• 參考文獻54-56
• 結論56-57
• 綜述 自噬與認知功能障礙57-66
• 參考文獻62-66
• 致謝66-67
• 個人簡歷67

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 閻超華,馮亦璞;丁基苯酞對原代培養(yǎng)胎大鼠皮層神經細胞外液NO及胞漿內cGMP水平的影響[J];藥學學報;1998年06期

2 宋萍萍;王東信;王沛鈺;;利多卡因對不同載脂蛋白E基因型小鼠短暫全腦缺血后腦損害程度的影響[J];中華醫(yī)學雜志;2005年48期

  本文關鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動力學變化及左旋丁基苯肽的干預作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：294578