本文關(guān)鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動(dòng)力學(xué)變化及左旋丁基苯肽的干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：隨著人口數(shù)量的增長(zhǎng)和人均壽命的延長(zhǎng)，腦血管病的發(fā)病率逐年上升，致使血管性癡呆(vascular dementia，VD)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)亦呈持續(xù)上升趨勢(shì)。中國(guó)作為腦卒中發(fā)病率最高的國(guó)家，VD患者數(shù)量急劇攀升，由此造成的社會(huì)負(fù)擔(dān)、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及家庭負(fù)擔(dān)十分沉重，從而倍受醫(yī)學(xué)界關(guān)注。 海馬神經(jīng)元與學(xué)習(xí)、記憶密切相關(guān)。海馬神經(jīng)元對(duì)缺血、缺氧異常敏感，在海馬神經(jīng)元的損傷過(guò)程中，可能通過(guò)干擾線粒體動(dòng)力學(xué)平衡導(dǎo)致能量代謝障礙，并通過(guò)多種途徑加速細(xì)胞死亡。線粒體動(dòng)力學(xué)（mtochondrialdnamics）是指線粒體處于不斷分裂(fission)與融合(fusion)的動(dòng)態(tài)過(guò)程。其中，線粒體融合蛋白1（mitofusin1，Mfn1）和線粒體融合蛋白2（mitofusin2，Mfn2）主要調(diào)控外膜融合，線粒體分裂蛋白1(mitochondrial fissionprotein1，F(xiàn)is1)參與線粒體分裂。研究發(fā)現(xiàn)，，線粒體動(dòng)力學(xué)失衡在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中扮演著重要角色，但其在VD發(fā)病機(jī)制中的作用尚未明確。本研究通過(guò)對(duì)上述線粒體融合分裂蛋白在VD小鼠海馬組織中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并觀察左旋丁基苯酞(l-3-n-butylphathlide, l-NBP)對(duì)線粒體動(dòng)力學(xué)變化的干預(yù)作用，以期為深入研究VD發(fā)病機(jī)制，探索藥物治療新導(dǎo)向提供依據(jù)。 方法：以清潔級(jí)健康雄性C57Bl/6小鼠（體重22-26g，年齡8-10w）為研究對(duì)象，采用反復(fù)三次結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，給予腦缺血20min(ischemia, I)-再灌注10min(reperfusion, R)處理，建立VD小鼠模型。實(shí)驗(yàn)共分5組：假手術(shù)對(duì)照組、VD模型組、預(yù)防給藥組（l-NBP30mg/kg）、低劑量治療組（l-NBP30mg/kg）和高劑量治療組（l-NBP60mg/kg）。其中，預(yù)防組于術(shù)前連續(xù)給藥7d，治療組于術(shù)后連續(xù)給藥28d，并給予模型組玉米油灌胃作為藥物溶劑對(duì)照。（1）術(shù)后第29d-35d，利用Morris水迷宮試驗(yàn)對(duì)各組小鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)、記憶能力測(cè)試；（2）行為學(xué)測(cè)試完畢后，HE染色觀察海馬組織病理學(xué)變化；（3）應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR（real-time FQ RT-PCR）檢測(cè)小鼠海馬組織Mfn1、Mfn2和Fis1mRNA水平的變化，應(yīng)用免疫蛋白印跡法（Western-blot）檢測(cè)海馬組織Mfn1、Mfn2和Fis1蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1Morris水迷宮試驗(yàn) 1.1術(shù)后第29-34d，定位航行實(shí)驗(yàn)測(cè)試各組小鼠學(xué)習(xí)成績(jī)，結(jié)果顯示： 與假手術(shù)組相比，VD模型組尋臺(tái)潛伏期明顯延長(zhǎng)(P0.05)；與VD模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組尋臺(tái)潛伏期明顯縮短(P0.05)，而低劑量治療組縮短不明顯。 1.2術(shù)后第35d，空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試各組小鼠記憶成績(jī)，結(jié)果顯示： 與假手術(shù)組相比，模型組平臺(tái)象限滯留時(shí)間百分比明顯減少(P0.05)；與模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組滯留時(shí)間百分比明顯延長(zhǎng)(P0.05)，低劑量治療組滯留時(shí)間無(wú)明顯延長(zhǎng)。 2各組小鼠海馬組織HE染色觀察 假手術(shù)組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊、致密，胞漿清亮，胞核飽滿，核仁清晰；其余各組小鼠海馬CA1區(qū)均可見片段性錐體細(xì)胞缺失，以VD模型組最為顯著，低劑量治療組次之，相比之下，預(yù)防組和高劑量治療組錐體細(xì)胞排列較為整齊，核固縮現(xiàn)象較少。 3PCR顯示海馬組織Mfn1、Mfn2、Fis1mRNA水平的變化情況 3.1Mfn1/2mRNA水平的變化情況： 與假手術(shù)組相比，模型組Mfn1/2mRNA水平增高(P0.05)；與模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組Mfn1/2mRNA水平均降低(P0.05)，低劑量治療組Mfn1/2mRNA水平仍較高。 3.2Fis1mRNA水平的變化情況： 與假手術(shù)組相比，模型組Fis1mRNA水平減少(P0.05)；與模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組Fis1mRNA水平均增高(P0.05)，低劑量治療組Fis1mRNA水平仍較低。 4Western-blot顯示海馬組織Mfn1、Mfn2、Fis1蛋白的表達(dá)情況 4.1Mfn1/2蛋白的表達(dá)情況： 與假手術(shù)組相比，模型組Mfn1/2蛋白表達(dá)增高(P0.05)；與模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組Mfn1/2蛋白表達(dá)均降低(P0.05)，低劑量治療組Mfn1/2蛋白仍處于高表達(dá)水平。 4.2Fis1蛋白的表達(dá)情況： 與假手術(shù)組相比，模型組Fis1蛋白表達(dá)降低(P0.05)；與模型組相比，預(yù)防組和高劑量治療組Fis1蛋白表達(dá)均增高(P0.05)，低劑量治療組Fis1蛋白仍處于低表達(dá)水平。 結(jié)論： 1本研究成功建立了VD小鼠模型，小鼠海馬組織可見明顯的組織病理學(xué)改變，經(jīng)Morris水迷宮試驗(yàn)證實(shí)了小鼠存在學(xué)習(xí)和記憶功能障礙。提示本模型能基本模擬臨床上VD患者的認(rèn)知功能障礙，是較理想的VD動(dòng)物模型。 2在VD小鼠中，海馬組織神經(jīng)元減少的同時(shí)，線粒體融合相關(guān)蛋白Mfn1、Mfn2的表達(dá)明顯增多，線粒體分裂相關(guān)蛋白Fis1的表達(dá)明顯降低。提示反復(fù)腦缺血再灌注刺激能打破海馬神經(jīng)元原有的線粒體動(dòng)力學(xué)的平衡態(tài)，而線粒體動(dòng)力學(xué)機(jī)制的失衡可能與海馬神經(jīng)元的損傷密切相關(guān)。 3在l-NBP干預(yù)作用下，小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能和線粒體動(dòng)力學(xué)失衡可在一定程度上得以改善，提示其神經(jīng)保護(hù)作用可能與調(diào)控線粒體平衡有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：血管性癡呆 海馬 認(rèn)知功能 線粒體動(dòng)力學(xué) 左旋丁基苯酞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R749.13;R965
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 引言12-15
• 第一部分 血管性癡呆小鼠模型的建立及海馬組織病理學(xué)改變15-26
• 前言15
• 材料與方法15-18
• 結(jié)果18-20
• 附圖20-22
• 討論22-23
• 小結(jié)23-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二部分 左旋丁基苯酞對(duì)血管性癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶損害的干預(yù)作用26-34
• 前言26
• 材料與方法26-27
• 結(jié)果27-29
• 附圖29-32
• 討論32
• 小結(jié)32-33
• 參考文獻(xiàn)33-34
• 第三部分 左旋丁基苯酞對(duì)血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動(dòng)力學(xué)影響34-56
• 前言34
• 材料與方法34-44
• 結(jié)果44-45
• 附圖45-51
• 附表51-52
• 討論52-53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 結(jié)論56-57
• 綜述 自噬與認(rèn)知功能障礙57-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷67

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 閻超華,馮亦璞;丁基苯酞對(duì)原代培養(yǎng)胎大鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞外液NO及胞漿內(nèi)cGMP水平的影響[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1998年06期

2 宋萍萍;王東信;王沛鈺;;利多卡因?qū)Σ煌d脂蛋白E基因型小鼠短暫全腦缺血后腦損害程度的影響[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年48期

  本文關(guān)鍵詞：血管性癡呆小鼠海馬組織線粒體動(dòng)力學(xué)變化及左旋丁基苯肽的干預(yù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：294578