本文關(guān)鍵詞：丁苯酞對STZ糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬NMDA受體亞基NR2B的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學(xué)》 2014年

丁苯酞對STZ糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬NMDA受體亞基NR2B的影響

李杰  

【摘要】：目的：糖尿病可導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙，主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)、記憶能力下降，嚴(yán)重者可導(dǎo)致癡呆。證據(jù)表明，離子型谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate, NMDA)受體的NR2B亞基通過影響海馬的突觸可塑性參與學(xué)習(xí)、記憶的形成，與糖尿病認(rèn)知功能障礙有著密切的聯(lián)系。丁苯酞是一種具有改善微循環(huán)，保護(hù)線粒體等作用的神經(jīng)保護(hù)藥物，已廣泛應(yīng)用于缺血性腦血管病，同時(shí)對糖尿病認(rèn)知功能障礙也具有改善作用，但其具體機(jī)制目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)防性應(yīng)用丁苯酞，觀察不同劑量丁苯酞對糖尿病大鼠認(rèn)知功能和海馬NMDA受體亞基NR2B表達(dá)的影響，為糖尿病認(rèn)知功能障礙的防治提供新思路。 方法： 1STZ糖尿病大鼠模型制備 清潔級健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠，通過腹腔注射60mg/kg的鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）建立1型糖尿病大鼠模型，對照組注射等體積的生理鹽水。72小時(shí)后測量尾靜脈的血糖，血糖值≥16.7mmol/L者，表示STZ糖尿病大鼠模型形成。 2分組 適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，55只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組（NC組，n=10）和糖尿病組（DM組，n=45）。糖尿病組又隨機(jī)分為3組：糖尿病對照組（DC組，n=15），丁苯酞低劑量組（DL組，60mg.kg-1.d-1， n=15）和丁苯酞高劑量組（DH組，120mg.kg-1.d-1， n=15）。成模后第一天開始干預(yù)，丁苯酞原液用玉米油溶解后灌胃，，NC組和DC組以等體積的玉米油灌胃，每日1次。各組均干預(yù)12周。 3一般觀察 每周測量大鼠血糖及體重。觀察大鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食水量及尿量等一般情況。 4行為學(xué)測試 應(yīng)用丁苯酞干預(yù)12周末行Morris水迷宮測試，包括定位航行和空間探索兩部分。記錄各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺(tái)次數(shù)。分析各組大鼠的學(xué)習(xí)、記憶能力。 5形態(tài)學(xué)及mRNA、蛋白觀察指標(biāo) 水迷宮測試后處死大鼠，取大腦海馬組織。應(yīng)用HE染色法觀察海馬組織形態(tài)，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-Time polymerase chain reaction，Real-Time PCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡（Western-Blot）和免疫組織化學(xué)染色法檢測大鼠海馬組織中NMDA受體亞基NR2B mRNA和蛋白水平的表達(dá)。 6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析；水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果用重復(fù)測量方差分析統(tǒng)計(jì)，使用重復(fù)測量數(shù)據(jù)多重比較配對的t檢驗(yàn)法(Bonferroni法)，可進(jìn)行每個(gè)分組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上作用的兩兩比較；使用多元方差分析的方法，可進(jìn)行每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上每個(gè)分組之間作用的兩兩比較。因數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布（P＞0.1），故應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示結(jié)果，應(yīng)用p＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1一般情況觀察 正常對照組大鼠精神狀態(tài)良好，反應(yīng)靈敏，毛色純白有光澤，進(jìn)食水及尿量正常；糖尿病組大鼠精神狀態(tài)差，精神萎靡，易激惹，毛色稀疏枯黃無光澤，有多食、多飲、多尿癥狀。 比較成模前及成模后12周末的血糖和體重情況： 成模前：NC組和DM組大鼠血糖（mmol/L）均正常，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（7.19±0.54VS7.18±0.46，P0.05）；體重（g）變化也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（130.46±4.98VS132.08±4.36，P0.05） 成模后12周末：與同期NC組相比，DM各組大鼠血糖均保持明顯升高（30.13±2.08，29.35±2.57，28.18±2.19VS7.44±0.47，P0.01），體重明顯降低（237.77±14.87,242.73±14.75,245.00±13.07VS340.14±6.65，P0.01），均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但糖尿病各亞組之間血糖及體重比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2行為學(xué)觀察（Morris水迷宮測試結(jié)果） 2.1基礎(chǔ)游泳速度 水迷宮測試前，為排除大鼠個(gè)體游泳速度差異，各組中隨機(jī)選取5只大鼠，讓其自由游泳60S，測量其基礎(chǔ)游泳速度，結(jié)果顯示：各組大鼠之間基礎(chǔ)游泳速度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（30.97±1.96，30.73±2.04，29.72±2.95和30.00±2.36，P0.05）。 2.2定位航行 第1天各組大鼠逃避潛伏期無明顯區(qū)別（P0.05）；第2-5天DC組逃避潛伏期較NC組明顯延長（P0.05），DL和DH組較DC組逃避潛伏期明顯縮短，但仍高于NC組（P0.05），而DH組從第3天到第5天，逃避潛伏期較DL組明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)，組別和天數(shù)之間不存在交互作用（P0.05）。 各組間第5天與第1天逃避潛伏期的變化：DC組逃避潛伏期無明顯變化（P＞0.05）NC、DL和DH組，逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05）。 各組間逃避潛伏期的順序?yàn)椋篘C組DH組DL組DC組。 2.3空間探索 與NC組相比，DC組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少（3.00±0.64VS15.68±1.57，P0.05）； 與DC組相比，DL和DH組（9.01±1.1和11.68±1.57）穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加，但仍少于NC組（P0.05）； 與DL組相比，DH組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 各組間穿越平臺(tái)次數(shù)的順序?yàn)椋篘C組DH組DL組DC組。 3HE染色 NC組大鼠海馬椎體神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊，層次清楚，形態(tài)完整，核大而圓。DC組神經(jīng)元細(xì)胞排列紊亂，層次不清，細(xì)胞可見空泡變性，出現(xiàn)細(xì)胞膜斷裂，細(xì)胞質(zhì)減少，細(xì)胞核固縮。丁苯酞治療組上述改變較DC組明顯減輕，且DH組優(yōu)于DL組。 4海馬組織中NR2B mRNA及蛋白的表達(dá) 4.1海馬組織NR2B mRNA的表達(dá) 與NC組相比，DC組，DL組和DH組海馬NR2B mRNA的表達(dá)均顯著降低（0.14±0.01，0.23±0.01，0.29±0.01VS0.35±0.02，P0.05）； 與DC組相比，DL和DH組海馬NR2B mRNA的表達(dá)均顯著增加（P0.05）； 與DL組相比，DH組海馬NR2B mRNA的表達(dá)顯著增加（P0.05） 4.2海馬組織NR2B蛋白表達(dá) 與NC組相比，DC組，DL組和DH組海馬NR2B蛋白的表達(dá)均顯著降低（0.37±0.03，0.49±0.04，0.60±0.04VS0.68±0.05，P0.05）； 與DC組相比，DL和DH組海馬NR2B蛋白的表達(dá)均顯著增加（P0.05）；P 與DL組相比，DH組海馬NR2B蛋白的表達(dá)亦顯著增加（P0.05） 5免疫組織化學(xué)染色 與NC組相比，DC組大鼠海馬組織中的NR2B陽性細(xì)胞表達(dá)顯著減少（平均光密度值：0.16±0.01VS0.47±0.10，P0.05）； 與DC組相比，DL和DH組海馬組織中的NR2B陽性細(xì)胞表達(dá)均顯著增加（平均光密度值：0.27±0.11，0.37±0.14VS0.47±0.10，P0.05），但仍低于NC組（P0.05）。 與DL組相比，DH組海馬組織中的NR2B陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論： 1STZ糖尿病大鼠12周末學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙。 2糖尿病大鼠出現(xiàn)認(rèn)知功能障礙時(shí)，海馬組織中NR2B的表達(dá)下降。 3預(yù)防性應(yīng)用丁苯酞，可改善糖尿病認(rèn)知功能障礙，提高海馬組織中NR2B的表達(dá)，并且丁苯酞高劑量組（120mg/kg）的療效優(yōu)于丁苯酞低劑量組（60mg/kg）。推測丁苯酞可能通過上調(diào)海馬NR2B的表達(dá)改善糖尿病認(rèn)知功能。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2;R749.1
【目錄】：

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5 陳坤;丁苯酞對阿爾茨海默病模型大鼠GFAP、VEGF影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2009年

6 劉佳;丁苯酞注射液對急性腦梗死患者腦血流量的影響及臨床療效觀察[D];吉林大學(xué);2008年

7 趙鴻平;丁苯酞對缺血性腦卒中保護(hù)作用機(jī)制的臨床研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

8 田怡;P38和ERK在AD模型大鼠中的變化及丁苯酞對其作用的研究[D];中南大學(xué);2009年

9 侯鐵軍;丁苯酞對腦缺血再灌注小鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖作用影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

10 康軍;丁苯酞對血管性癡呆小鼠膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶代謝影響機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：丁苯酞對STZ糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙及海馬NMDA受體亞基NR2B的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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