本文關(guān)鍵詞：淀粉樣前體蛋白的突變?cè)贏β形成過(guò)程中作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《北京理工大學(xué)》 2015年

淀粉樣前體蛋白的突變?cè)贏β形成過(guò)程中作用研究

張歡歡  

【摘要】：阿爾茨海默癥是當(dāng)今威脅老年人身體健康的主要疾病之一,目前還沒(méi)有很好的治療方法和藥物。Aβ是阿爾茨海默癥患者腦內(nèi)神經(jīng)炎性老年斑的主要成分。Aβ短肽的產(chǎn)生是淀粉樣前體蛋白(Amyloid Precursor Protein,APP)依次被β-分泌酶和γ-分泌酶水解而形成的,據(jù)研究Aβ(1-40,1-38)和Aβ(1-42,3-40)較其他形式Aβ更具有淀粉樣蛋白毒性。研究表明,APP基因突變是家族性阿爾茨海默癥的遺傳因素之一,對(duì)APP基因突變的深入將有助于加深對(duì)阿爾茨海默癥致病相關(guān)通路的認(rèn)識(shí)。本課題選取5個(gè)APP單核苷酸突變類(lèi)型:A673T、A673V、E682K、E693G、E693Q,采用重疊延伸PCR的方法獲得5個(gè)APP突變基因,雙酶切后將突變基因與pcDNA4質(zhì)粒連接,構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒。以pcDNA4為對(duì)照組,分別將pcDNA4/APP WT-mycHis或pcDNA4/APP-mycHis突變質(zhì)粒與pcDNA4/BACE1-mycHis瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞,進(jìn)行突變基因的表達(dá)。采用Western Blot的方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染APP突變質(zhì)粒后APP水解切割過(guò)程相關(guān)蛋白水平,包括APP蛋白、C99片段等,采用LC-MS/MS檢測(cè)Aβ產(chǎn)生過(guò)程中生成的三肽、四肽。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與APP野生型相比,A673V、E682K、E693Q三種突變均使APP蛋白水解量增多;雖然相比于APP野生型,E682K、E693G兩種突變均使C99片段的生成量提高,但A673T突變能使C99與C83片段生成量的比率明顯降低。ELISA結(jié)果顯示A673T組Aβ42水平明顯低于APP野生型,其他4個(gè)突變組Aβ42水平均高于APP野生型;而A673T組Aβ40水平與APP野生型相比卻無(wú)明顯差異,其他4個(gè)突變組Aβ40水平均低于APP野生型;Aβ42/Aβ40比率顯示,A673T組Aβ42/Aβ40較APP野生型明顯降低,而其他四個(gè)突變組Aβ42/Aβ40比率均明顯高于APP野生型。LC-MS/MS質(zhì)譜結(jié)果顯示A673T組Aβ40和Aβ42水平均降低;A673V和E693Q兩組Aβ40水平降低,Aβ42水平升高;E682K組Aβ40和Aβ42水平均升高;E693G組Aβ40水平升高,Aβ42水平降低。綜合研究結(jié)果,A673T突變能通過(guò)調(diào)控毒性Aβ生成量減少,從而對(duì)阿爾茨海默癥起到一定保護(hù)作用。其他4種突變均能夠促進(jìn)APP蛋白水解產(chǎn)生Aβ42,這對(duì)理解阿爾茨海默癥病理發(fā)生APP機(jī)制增加了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：北京理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R749.16
【目錄】：

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