本文關(guān)鍵詞：強(qiáng)迫游泳應(yīng)激誘導(dǎo)經(jīng)前煩躁障礙（PMDD）肝氣郁證大鼠模型的制備以及模型大鼠神經(jīng)遞質(zhì)及其受體的變化

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【摘要】：目的:制備并鑒定出具備符合經(jīng)前期煩躁障礙(Premenstrual Dysphoric Disorder,PMDD)診斷首要標(biāo)準(zhǔn)的PMDD肝氣郁病證屬性的大鼠模型,并通過該病證大鼠模型研究,最終形成PMDD肝氣郁病證大鼠模型造模和評(píng)價(jià)的技術(shù)方法。同時(shí),以模型為載體,檢測(cè)各腦區(qū)神經(jīng)遞質(zhì)含量變化及與發(fā)病密切相關(guān)受體基因和蛋白表達(dá),初步探查其發(fā)病機(jī)制。方法:本研究采用動(dòng)物行為實(shí)驗(yàn)與神經(jīng)生化指標(biāo)檢測(cè)相結(jié)合的方法進(jìn)行探討。(1)采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的方法,選取間期1期和接受期為測(cè)試點(diǎn),依次進(jìn)行間期1期、接受期、間期1期3次強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST),每次間隔2個(gè)周期即9天,篩選出懸浮不動(dòng)時(shí)間等行為參數(shù)具有動(dòng)情周期依賴性的大鼠;(2)對(duì)篩選出的大鼠行卵巢切除術(shù)后,這種行為表型消失;(3)對(duì)卵巢切除大鼠進(jìn)行外源性性激素誘導(dǎo)人工周期,上病證行為表型又出現(xiàn);(4)對(duì)以上誘導(dǎo)人工周期大鼠“模型”進(jìn)行氟西汀和舒郁膠囊干預(yù),觀察懸浮不動(dòng)時(shí)間等行為參數(shù)的動(dòng)情周期依賴性消失現(xiàn)象,以嚴(yán)格科學(xué)證據(jù),證明該病證大鼠模型屬于PMDD肝氣郁病證大鼠模型;(5)藥物干預(yù)后采用ELSA試劑盒檢測(cè)血清及部分腦區(qū)中5-HT、NE、GABA在各組間的含量變化,以及采用RT-PCR、western-blot方法檢測(cè)GABAAR4α的基因和蛋白表達(dá),以初步探查其神經(jīng)生化機(jī)制。結(jié)果:(1)采用強(qiáng)迫游泳的方式,篩選出的模型組大鼠的癥狀發(fā)生具有動(dòng)情周期依賴性:其接受期與非接受期的懸浮不動(dòng)時(shí)間、懸浮不動(dòng)次數(shù)具有顯著性差異(P0.05),并且高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中時(shí)間百分比(OT%)與次數(shù)百分比(OE%)也同樣出現(xiàn)顯著性差異(P0.05),糖水實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M與對(duì)照組具有顯著性差異(P0.05);(2)卵巢切除之后,這種在接受期與非接受期的行為表型差異消失(P0.05);(3)通過外源激素誘導(dǎo)出人工周期后,模型組大鼠在接受期與非接受期的懸浮不動(dòng)時(shí)間、次數(shù),及OT%、OE%又出現(xiàn)顯著性差異(P0.05,P0.01);(4)藥物干預(yù)后,僅模型組存在這種表型差異(P0.05),兩個(gè)給藥組的差異性消失(P0.05);(5) ELSA試劑盒結(jié)果顯示:5-HT在外周血血清及各腦區(qū)中的含量,模型組要比對(duì)照組顯著降低(P0.05,P0.01);氟西汀組相比模型組除海馬腦區(qū)外均有顯著升高(P0.05);舒郁膠囊組相比模型組在下丘腦中顯著性升高,其余腦區(qū)及血清中顯示升高的趨勢(shì)。NE在外周血血清中模型組較對(duì)照組顯著升高(P0.05),給藥組較模型組顯著降低(P0.05);在腦區(qū)中結(jié)果相反,模型組較對(duì)照組顯著降低(P0.05),氟西汀組在下丘腦及海馬中較模型組顯著升高(P0.05),舒郁膠囊組在額葉及海馬中較模型組顯著升高(P0.05)。GABA在額葉、下丘腦、海馬中的含量,模型組比對(duì)照組顯著降低(P0.05,P0.01),并且兩個(gè)給藥組比模型組顯著升高(P0.05,P0.01)。Western-Blot和RT-PCR顯示,GABAAR4α的基因和蛋白表達(dá)模型組相比對(duì)照組都出現(xiàn)顯著性增加(P0.01),氟西汀及舒郁膠囊給藥組較模型組顯著性降低(P0.05,P0.01)。結(jié)論:(1)采用強(qiáng)迫游泳方法篩選的PMDD肝氣郁證的大鼠模型符合PMDD診斷首要標(biāo)準(zhǔn):動(dòng)情非接受期(相似于經(jīng)前期)“癥狀出現(xiàn)”;接受期(相似于經(jīng)行后卵泡期)“癥狀減低消失”。并且通過完整的證據(jù)鏈證實(shí)這種造模方法的可靠性。(2)在PMDD肝氣郁證中,抑郁與焦慮樣情緒并行發(fā)生,都具有動(dòng)情周期依賴性,并且其產(chǎn)生的機(jī)制,與5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及GABAAR4α的基因和蛋白表達(dá)變化密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：PMDD肝氣郁證 模型標(biāo)準(zhǔn)化 機(jī)制探討 強(qiáng)迫游泳 單胺類神經(jīng)遞質(zhì) GABAAR4α
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 提要3-5
• Abstract5-12
• 引言12-14
• 研究一 PMDD肝氣郁證大鼠模型的制備與驗(yàn)證14-36
• 實(shí)驗(yàn)一 PMDD肝氣郁證大鼠模型的制備14-26
• 1 實(shí)驗(yàn)材料14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 1.2 藥品與試劑14
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器14
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及方法14-18
• 2.1 PMDD肝氣郁證大鼠模型的制備方法14-17
• 2.1.1 大鼠飼養(yǎng)14-15
• 2.1.2 大鼠初篩15-16
• 2.1.3 模型的制備16
• 2.1.4 動(dòng)物分組16-17
• 2.2 行為檢測(cè)方法17-18
• 2.2.1 強(qiáng)迫游泳17
• 2.2.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)17
• 2.2.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)17-18
• 2.2.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)18
• 2.3 統(tǒng)計(jì)分析方法18
• 3 結(jié)果18-23
• 3.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)18-20
• 3.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)20-21
• 3.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)21-22
• 3.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)22-23
• 4 討論23-26
• 實(shí)驗(yàn)二 PMDD肝氣郁證大鼠模型的檢驗(yàn)26-36
• 1 實(shí)驗(yàn)材料26-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物26
• 1.2 藥品與試劑26
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器26-27
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法27-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)流程27
• 2.2 卵巢切除27
• 2.3 激素誘導(dǎo)27-28
• 2.4 藥物干預(yù)28
• 2.5 統(tǒng)計(jì)分析方法28
• 3 結(jié)果28-33
• 3.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）28-30
• 3.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)（OFT）30-31
• 3.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)（EPM）31-33
• 4 討論33-36
• 研究二 PMDD肝氣郁證大鼠模型行為表型及藥物干預(yù)的神經(jīng)生化機(jī)制初探36-52
• 1 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 1.2 材料與試劑36-37
• 1.2.1 ELISA試劑盒36
• 1.2.2 Western Blot36-37
• 1.2.3 RT-PCR37
• 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器37-38
• 2 實(shí)驗(yàn)方法38-43
• 2.1 血清采集及組織取材38
• 2.2 ELISA試劑盒檢測(cè)方法38-39
• 2.3 蛋白免疫印記實(shí)驗(yàn)39-41
• 2.4 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)41-43
• 2.5 數(shù)據(jù)處理分析43
• 3 結(jié)果43-48
• 3.1 ELSA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-46
• 3.1.1 大鼠血清及各腦區(qū) 5-HT含量的檢測(cè)結(jié)果43-44
• 3.1.2 大鼠血清及各腦區(qū)NE含量的檢測(cè)結(jié)果44-45
• 3.1.3 各腦區(qū)中GABA含量檢測(cè)結(jié)果45-46
• 3.2 Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-47
• 3.3 RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-48
• 4 討論48-52
• 綜合分析與初步結(jié)論52-58
• 1 PMDD肝氣郁證的研究現(xiàn)狀52-53
• 2 PMDD肝氣郁證大鼠模型研究現(xiàn)狀53-54
• 3 PMDD肝氣郁證模型制備方法的選擇54-55
• 4 與PMDD相關(guān)腦區(qū)55
• 5 干預(yù)藥物的選擇55-56
• 6 綜合結(jié)果與分析56-58
• 研究特色與不足58-59
• 結(jié)語(yǔ)59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 附錄67-69
• 致謝69-70
• 論文著作70-72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄭莉明;史亞飛;吳皓萌;徐志偉;;中樞5-HT能系統(tǒng)在早發(fā)性抑郁中的作用研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2015年01期

2 薛麗香;張鳳珠;孫瑞娟;董爾丹;;我國(guó)疾病動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀和展望[J];中國(guó)科學(xué):生命科學(xué);2014年09期

3 李曉娟;白曉暉;陳家旭;劉群;劉sボ，

本文編號(hào)：875738