本文關鍵詞：甘草酸單克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：目的:制備特異性的甘草酸(GA)單克隆抗體。方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清檢測陽性后,取其脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞SP2/0按10∶1的比例融合;用間接競爭ELISA法和有限稀釋法進行單克隆雜交瘤細胞的篩選;用陽性細胞株誘導制備腹水抗體;用辛酸硫酸銨法純化抗體,并進行交叉反應檢測。結(jié)果:獲得了穩(wěn)定分泌抗甘草酸的單克隆抗體雜交瘤細胞株GA-Mab-DF5,腹水抗體純化后純度達98%,回收率達80%。線性檢測范圍為4～64μg.mL-1,R2=0.9986,并且與BSA、明膠、膽酸、去氧膽酸、芍藥苷、黃芩苷等無交叉反應。結(jié)論:成功獲得能穩(wěn)定分泌甘草酸單克隆抗體的雜交瘤細胞株,靈敏度、特異性均較高,為樣品中甘草酸的快速微量檢測及免疫親和色譜柱制備奠定了基礎。
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院;北京中醫(yī)藥大學中藥學院;北京中醫(yī)藥大學科學實驗中心;
【關鍵詞】： 甘草酸 單克隆抗體 制備 鑒定 雜交瘤細胞株 免疫親和色譜柱 酶聯(lián)免疫吸附法
【基金】：國家自然科學基金(30973709;81274043) 北京市重點實驗室2011階梯計劃(Z111107055311080) 北京中醫(yī)藥大學創(chuàng)新團隊
【分類號】：R392
【正文快照】： 甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)是常用中藥甘草中最主要的活性成分。甘草或其復方制劑中甘草酸的含量分析主要以高效液相色譜法(HPLC)為主[1],但該方法檢測儀器昂貴,檢測成本高,耗時長,難以適應環(huán)境及市場產(chǎn)品的現(xiàn)場抽查及產(chǎn)品進出口快速通關的要求。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢

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本文編號：870290