本文關(guān)鍵詞：甘草酸單克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：目的:制備特異性的甘草酸(GA)單克隆抗體。方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清檢測(cè)陽性后,取其脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0按10∶1的比例融合;用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法和有限稀釋法進(jìn)行單克隆雜交瘤細(xì)胞的篩選;用陽性細(xì)胞株誘導(dǎo)制備腹水抗體;用辛酸硫酸銨法純化抗體,并進(jìn)行交叉反應(yīng)檢測(cè)。結(jié)果:獲得了穩(wěn)定分泌抗甘草酸的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株GA-Mab-DF5,腹水抗體純化后純度達(dá)98%,回收率達(dá)80%。線性檢測(cè)范圍為4～64μg.mL-1,R2=0.9986,并且與BSA、明膠、膽酸、去氧膽酸、芍藥苷、黃芩苷等無交叉反應(yīng)。結(jié)論:成功獲得能穩(wěn)定分泌甘草酸單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,靈敏度、特異性均較高,為樣品中甘草酸的快速微量檢測(cè)及免疫親和色譜柱制備奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;北京中醫(yī)藥大學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 甘草酸 單克隆抗體 制備 鑒定 雜交瘤細(xì)胞株 免疫親和色譜柱 酶聯(lián)免疫吸附法
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30973709;81274043) 北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2011階梯計(jì)劃(Z111107055311080) 北京中醫(yī)藥大學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 甘草酸(glycyrrhizic acid,GA)是常用中藥甘草中最主要的活性成分。甘草或其復(fù)方制劑中甘草酸的含量分析主要以高效液相色譜法(HPLC)為主[1],但該方法檢測(cè)儀器昂貴,檢測(cè)成本高,耗時(shí)長(zhǎng),難以適應(yīng)環(huán)境及市場(chǎng)產(chǎn)品的現(xiàn)場(chǎng)抽查及產(chǎn)品進(jìn)出口快速通關(guān)的要求。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢

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