本文關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮細胞黏附分子胞外區(qū)基因真核表達載體構(gòu)建及表達

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【摘要】：目的構(gòu)建并表達血管內(nèi)皮細胞黏附分子(VCAM-1)胞外區(qū)基因真核表達載體。方法從小鼠NIH/3T3細胞提取總RNA,以其為模板通過RT-PCR擴增VCAM-1胞外區(qū)(D1-D4結(jié)構(gòu)域)cDNA。利用PCR獲得VCAM-1胞外區(qū)基因,連接pMD19-T載體,進行基因序列測序。將VCAM-1 D1-D4目的片段插入到真核表達載體pIRES2-AcGFP1-Nuc中,構(gòu)建重組真核表達質(zhì)粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1。經(jīng)雙酶切鑒定VCAM-1胞外區(qū)基因真核表達載體構(gòu)建的成功與否。利用脂質(zhì)體把pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1導(dǎo)入至人B淋巴性白血病細胞株(Raji)內(nèi)。結(jié)果基因測序結(jié)果表明成功擴增出VCAM-1胞外區(qū)基因,雙酶切鑒定表明重組的真核表達質(zhì)粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1構(gòu)建成功。Western blot結(jié)果顯示導(dǎo)入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1質(zhì)粒的Raji細胞中VCAM-1高表達。細胞結(jié)合實驗表明,表達的VCAM-1與前B細胞(70Z/3)表面的VLA-4特異性結(jié)合。結(jié)論 VCAM-1真核表達載體構(gòu)建及表達成功,為前B細胞克隆形成機理以及為B細胞分化發(fā)育研究提供實驗依據(jù)。
【作者單位】： 遼寧師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;大連大學(xué)免疫學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 血管內(nèi)皮細胞黏附分子 真核表達載體 真核表達
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30972675,31270864) 大連市科技計劃項目(2010J21DW011)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： 前B細胞分化發(fā)育階段被認為是整個B細胞發(fā)育過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1]。前B細胞增殖、分化與其生長發(fā)育的造血微環(huán)境密切相關(guān)。它通過細胞表面的黏附因子與造血微環(huán)境中的基質(zhì)細胞黏附,才能增殖、分化。在前B細胞與基質(zhì)細胞相互作用中,前B細胞表面的遲現(xiàn)抗原4(very late antigen-4,

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本文編號：844727