發(fā)布時(shí)間：2021-05-20 04:14

　　隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,人類迫切的需要對(duì)各種疾病進(jìn)行透徹的了解和研究,從而開發(fā)出能夠有效治療疾病的手段。但是,由于倫理道德的限制,科學(xué)研究并不能直接以活人作為實(shí)驗(yàn)研究的對(duì)象。而動(dòng)物可以作為科學(xué)研究的直接對(duì)象,科學(xué)家可以直接在符合倫理審查的活體動(dòng)物上做實(shí)驗(yàn)。與小鼠、大鼠等嚙齒類動(dòng)物相比,豬作為在器官構(gòu)造,大小及生理結(jié)構(gòu)上更加接近于人的物種之一,因其諸多的優(yōu)勢(shì)被廣泛用于科學(xué)研究,作為動(dòng)物模型,豬擁有的最大優(yōu)勢(shì)。自基因編輯技術(shù)現(xiàn)世以來(lái),科學(xué)家已經(jīng)能夠通過(guò)基因編輯,如鋅指核酸酶（zinc finger nucleases,ZFN）技術(shù)、轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶（transcription activator-like effector nucleases,TALEN）技術(shù)和成簇規(guī)律性間隔的短回文重復(fù)序列（Clustered regularly interspaced short palidromic repeats,CRISPR/Cas）技術(shù)等獲得基因編輯的動(dòng)物,從而拿到動(dòng)物疾病模型,進(jìn)行相關(guān)疾病的研究。目前科研人員已經(jīng)通過(guò)基因編輯技術(shù)逐漸建立了以小鼠,大鼠,兔子,豬為對(duì)象的FAH疾病模型。經(jīng)... 

【文章來(lái)源】：曲阜師范大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 引言
    1.1 基因編輯技術(shù)的發(fā)展
        1.1.1 鋅指核酸酶(ZFN)
        1.1.2 TALEN
        1.1.3 歸巢核酸內(nèi)切酶
        1.1.4 CRISPR/Cas9系統(tǒng)
    1.2 FAH~(-/-)模型動(dòng)物的研究進(jìn)展
        1.2.1 動(dòng)物疾病模型的進(jìn)展
        1.2.2 FAH肝損傷模型動(dòng)物的研究進(jìn)展
    1.3 本研究的目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)相關(guān)液體配方
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 豬胎兒成纖維細(xì)胞系的建立
        2.5.2 gRNA的設(shè)計(jì)
        2.5.3 gRNA-CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
        2.5.4 豬成纖維細(xì)胞的核電轉(zhuǎn)及FAH缺陷單克隆細(xì)胞系的獲取
        2.5.5 豬卵母細(xì)胞的采集及體外成熟培養(yǎng)
        2.5.6 體細(xì)胞克隆
        2.5.7 胚胎移植
        2.5.8 FAH基因敲除豬的基因型鑒定
        2.5.9 組織石蠟切片及HE染色
        2.5.10 Western Blot
        2.5.11 免疫組化染色
        2.5.12 Masson染色
第3章 結(jié)果
    3.1 豬原代胎兒成纖維細(xì)胞的制作培養(yǎng)
    3.2 FAH基因敲除細(xì)胞系的制作
    3.3 體細(xì)胞克隆與胚胎移植獲得懷孕母豬
    3.4 FAH模型克隆豬出生
    3.5 NTBC撤除后FAH~(-/-)豬出現(xiàn)肝臟和腎臟的壞死
    3.6 NTBC撤除后FAH~(-/-)豬出現(xiàn)肝纖維化
    3.7 外周血的血常規(guī)
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文及研究成果
致謝



本文編號(hào)：3197067