目的:構(gòu)建人鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8（zinc transporter 8,ZnT8）嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor,CAR）的慢病毒表達(dá)載體,為研究抗原特異性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells,Tregs）在1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）自身免疫中的調(diào)節(jié)作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:通過分子克隆及基因重組技術(shù)構(gòu)建PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表達(dá)載體質(zhì)粒,并制備ZnT8 scfvCAR慢病毒;利用ZnT8 scfv-CAR慢病毒感染Tregs,流式細(xì)胞術(shù)檢測綠色熒光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表達(dá)確定慢病毒感染效率;細(xì)胞計(jì)數(shù)評估Tregs細(xì)胞增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測增殖細(xì)胞中CD4、CD25、Foxp3和Helios的表達(dá)。結(jié)果:酶切鑒定和基因測序結(jié)果顯示PLVX-EGFP-ZnT8 scfv慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功;質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后制備濃縮慢病毒滴度為2.4×10⁸TU/μL;ZnT8 scfv-CAR慢病毒轉(zhuǎn)染Tregs后GFP... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 ZnT8 scfv-CAR慢病毒載體質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 慢病毒制備并感染293T細(xì)胞
        1.2.3 流式分選Tregs
        1.2.4 ZnT8 scfv-CAR Tregs的構(gòu)建與擴(kuò)增
        1.2.5 ZnT8 scfv-CAR Tregs體外擴(kuò)增后表型檢測
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定
    2.2 ZnT8 scfv-CAR慢病毒成功轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞
    2.3 ZnT8 scfv-CAR Tregs的鑒定
    2.4 ZnT8 scfv-CAR Tregs能在體外高效擴(kuò)增
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]體外高效擴(kuò)增人外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞技術(shù)的建立[J]. 王星,吳倩,王悅舒,張玲玉,秦瑤,許馨予,張梅.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2018(08)
[2]Screening and identification of human Zn T8-specific single-chain variable fragment （scFv） from type 1 diabetes phage display library[J]. Qian Wu,Xiaodong Wang,Yong Gu,Xiao Zhang,Yao Qin,Heng Chen,Xinyu Xu,Tao Yang,Mei Zhang.  Science China（Life Sciences）. 2016(07)



本文編號：3179793