本文關鍵詞：羅格列酮對哮喘大鼠NF-κB表達及氣道炎癥的影響

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【摘要】：目的:觀察羅格列酮對哮喘大鼠細胞核因子-Kappa B(nuclear factor-[kappa]B,NF-κB)、血清轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表達的影響。建立大鼠哮喘模型,通過觀察羅格列酮干預后肺組織NF-κBp65表達及血清TGF-β1濃度的變化,探討NF-κB在氣道炎癥及重塑中的作用及羅格列酮對其影響。方法:將30只清潔級SD大鼠(雌性,6周齡,體重120g-150g之間)隨機分成正常對照組、哮喘模型組和羅格列酮干預組,每組10只。哮喘組大鼠于實驗第1、8天腹腔注射卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)100mg和氫氧化鋁100mg(混于生理鹽水2m L中)進行致敏。第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉霧化吸入箱內(nèi),給予OVA溶液霧化吸入,隔日1次,每次30min,共激發(fā)20次。卵清蛋白溶液濃度按照1%、1.5%、2%、2.5%、3%依次遞增,每4次激發(fā)后調(diào)整一次。正常對照組以等量生理鹽水代替OVA,方法同上。羅格列酮組則在每次OVA霧化吸入前30min按5mg/kg經(jīng)口腔灌服方式給予大鼠羅格列酮。末次激發(fā)24小時后用1%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,取材。收集各組大鼠支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、血清及肺組織。測定BALF中細胞計數(shù)及分類;部分肺組織行病理切片,行蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色,觀察形態(tài)學變化,并應用計算機圖像分析軟件測定支氣管管壁厚度(總管壁面積/支氣管基底膜周徑)、支氣管平滑肌厚度;分別用RT-PCR及免疫組化的方法測定肺組織中NF-κBp65的表達,應用圖像分析軟件測定NF-κBp65的相對表達強度;ELISA法測定血清中TGF-β1的濃度。結(jié)果:1哮喘模型的建立通過腹腔注射卵清蛋白致敏及反復霧化吸入激發(fā)的方式成功建立大鼠哮喘模型,于實驗過程中可見哮喘大鼠精神萎靡、煩躁不安、呼吸急促、腹肌痙攣、站立不穩(wěn)、反應遲鈍等表現(xiàn)。2支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細胞計數(shù)及分類:哮喘組BALF中細胞總數(shù)(35.21±0.51)高于羅格列酮組(14.98±0.67),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);且其均高于正常對照組(9.49±0.10),差異具有統(tǒng)計學意義(F=7563.975,P0.01)。哮喘組BALF中性粒細胞數(shù)(0.26±0.05)高于羅格列酮組(0.58±0.05),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);且其均高于正常對照組(0.26±0.05),差異具有統(tǒng)計學意義(F=664.996,P0.01)。哮喘組BALF淋巴細胞數(shù)(2.83±0.08)高于羅格列酮組(2.15±0.04),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);且其均高于正常對照組(1.31±0.03),差異具有統(tǒng)計學意義(F=1966.297,P0.01)。哮喘組BALF嗜酸性粒細胞數(shù)(3.53±0.06)高于羅格列酮組(1.27±0.06),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);且其均高于正常對照組(0.52±0.08),差異具有統(tǒng)計學意義(F=5294.103,P0.01)。3病理圖像分析結(jié)果:哮喘組大鼠肺組織病理切片可見氣管及血管周圍炎癥細胞明顯增多,支氣管黏膜破壞、上皮細胞脫落、粘液分泌增多,氣道平滑肌明顯增厚。羅格列酮干預后可明顯減輕以上病理改變。圖像分析結(jié)果示:哮喘組大鼠的氣道壁厚度(μm2/μm)與平滑肌厚度(μm2/μm)(98.49±2.58;45.29±2.26)均高于羅格列酮組(86.03±2.63;33.54±1.35),有統(tǒng)計學意義(P0.01);兩組又均高于對照組(70.75±2.10;17.62±1.12),有統(tǒng)計學意義(F=323.15,P0.01;F=704.562,P0.01)。4 RT-PCR測定肺組織NF-κBp65m RNA的表達:哮喘組大鼠肺組織NF-κBp65m RNA表達(0.741±0.020)高于羅格列酮組(0.490±0.024),存在統(tǒng)計學意義(P0.01);且兩組均高于正常對照組(0.342±0.003),存在統(tǒng)計學意義(F=1267.128,P0.01)。5免疫組化法測定肺組織NF-κBp65的表達:哮喘組大鼠肺組織中NF-κBp65的平均光度值(0.51±0.09)高于羅格列酮組(0.42±0.04),有統(tǒng)計學意義(P0.01);兩組均高于對照組(0.27±0.06),有統(tǒng)計學意義(F=36.109,P0.01)。6 ELISA法測定血清中TGF-β1的含量(ng/ml):哮喘組大鼠血清中的TGF-β1含量(30.63±1.76)高于羅格列酮組(23.57±0.97),有統(tǒng)計學意義(P0.01),兩組均高于對照組(17.13±1.13),有統(tǒng)計學意義(F=257.16,P0.01)。7相關性分析結(jié)果:肺組織中NF-κBp65m RNA及NF-κBp65含量與BALF中細胞總數(shù)呈顯著正相關(r=0.979,P0.01;r=0.777,P0.01),與血清TGF-β1的表達水平呈顯著正相關(r=0.965,P0.01;r=0.907,P0.01);TGF-β1與平滑肌厚度顯著正相關(r=0.986,P0.01)。結(jié)論:1通過抗原致敏和反復霧化激發(fā),成功建立了大鼠哮喘模型。病理結(jié)果顯示哮喘組大鼠氣道中存在明顯的炎性細胞浸潤、氣道壁及平滑肌增厚,而羅格列酮干預可明顯減輕上述病理表現(xiàn)。2哮喘組大鼠肺組織中NF-κBp65在基因和蛋白水平的表達明顯高于對照組,提示哮喘的發(fā)生可能與NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路的激活有關。羅格列酮組大鼠肺組織中NF-κBp65在基因和蛋白水平的表達均低于哮喘組而氋于對照組,提示羅格列酮可抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路的激活。3羅格列酮可降低哮喘大鼠血清中TGF-β1的水平,可減輕氣道重塑。4相關性分析結(jié)果顯示大鼠肺組織NF-κBp65的表達水平與BALF中細胞數(shù)及血清中TGF-β1的表達呈正相關,TGF-β1與平滑肌厚度呈正相關。表明羅格列酮可能通過抑制NF-κB信號轉(zhuǎn)導通路抑制哮喘的氣道炎癥及重塑。
【關鍵詞】：哮喘 羅格列酮 NF-κB TGF-β1 氣道炎癥 氣道重塑
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-20
• 結(jié)果20-22
• 附圖22-32
• 附表32-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻38-42
• 綜述 PPARγ對支氣管哮喘的作用研究進展42-51
• 參考文獻47-51
• 致謝51-52
• 個人簡歷52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：807106