本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）旁分泌角化細(xì)胞生長因子（KGF）對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠肺泡上皮細(xì)胞（MLE12）損傷的修復(fù)作用及機(jī)制

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【摘要】：研究課題:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)旁分泌角化細(xì)胞生長因子(KGF)對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠肺泡上皮細(xì)胞(MLE12)損傷的修復(fù)作用及機(jī)制研究背景:急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是指是由感染、機(jī)械刺激、休克、輸血等病因?qū)е碌姆蚊?xì)血管內(nèi)皮和肺泡上皮彌漫性損害,以急性頑固性低氧血癥為臨床表現(xiàn)的急性呼吸衰竭,目前尚無有效治療手段改善ARDS的病死率。動物及細(xì)胞研究顯示,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMSCs)通過歸巢、移植再生作用、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)肺泡液清除率、改變肺血管內(nèi)皮通透性及其他機(jī)制促進(jìn)肺損傷修復(fù),為ARDS早期治療提供新思路。前期研究發(fā)現(xiàn),MSC能明顯修復(fù)LPS誘導(dǎo)的ARDS小鼠肺上皮損傷,同時(shí)伴有肺泡灌洗液中KGF水平明顯增加,而KGF能影響肺上皮細(xì)胞的生長、分化和成型,因此可以推斷MSC可能通過旁分泌KGF修復(fù)ARDS肺上皮損傷,近年來許多研究發(fā)現(xiàn)了RAGE對于肺上皮的重要修復(fù)作用,因此上皮細(xì)胞的RAGE可能是KGF發(fā)揮作用的關(guān)鍵分子。研究目的:本研究擬在體外BMSC與肺泡上皮細(xì)胞間接共培養(yǎng)模型的基礎(chǔ)上,通過干預(yù)MSC的RAGE表達(dá),探討ARDS時(shí)BMSC旁分泌KGF對肺泡上皮修復(fù)作用,以及上皮細(xì)胞的RAGE在BMSC旁分泌KGF對LPS誘導(dǎo)的肺泡上皮損傷修復(fù)中起到的作用,從而更好的理解MSC治療ARDS的機(jī)制,為今后改善MSC對ARDS的治療效果提供新的研究基礎(chǔ)。研究方法:1.建立LPS誘導(dǎo)的MLE12細(xì)胞損傷模型、體外間接共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图凹?xì)胞處理細(xì)胞分組如下:空白組:MLE12單獨(dú)培養(yǎng);損傷肺泡上皮細(xì)胞組:MLE12加入LPS孵育;間接共培養(yǎng)對照組:MLE12與MSC間接共培養(yǎng);間接共培養(yǎng)損傷組:MLE12與MSC間接共培養(yǎng)加入LPS孵育;KGF組:MLE12加入LPS孵育,加入KGF;RAGE抗體組:MLE12與MSC共培養(yǎng)加入LPS加RAGE抗體。2.標(biāo)本的采集和檢測:間接共培養(yǎng)1d,3d或7d后,收集MLE12細(xì)胞,應(yīng)用western blot方法測定細(xì)胞中RAGE,ZO-1的含量;收集三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的培養(yǎng)基,應(yīng)用ELISA方法測定培養(yǎng)基上清液中KGF,RAGE的含量。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,變量以均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差(mean+SD)表示,多組計(jì)量資料間比較采用Bonferroni校正檢驗(yàn)分析,以P0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.MSC對肺上皮損傷有修復(fù)作用。在1d、3d、7d的3個(gè)時(shí)間點(diǎn),各組MLE12表面的ZO-1表達(dá),WB結(jié)果顯示損傷組較空白對照組相比ZO-1蛋白表達(dá)量下降(P0.05);間接共培養(yǎng)損傷組較間接損傷組相比ZO-1蛋白表達(dá)量增加(P0.05),KGF組較損傷組相比ZO-1蛋白表達(dá)量明顯增加(P0.05);2.MSC修復(fù)上皮損傷,可能通過旁分泌KGF。在1d、3d、7d的3個(gè)時(shí)間點(diǎn),各組條件培養(yǎng)基KGF表達(dá),ELISA結(jié)果顯示損傷組較空白對照組相比,培養(yǎng)基上清液中KGF因子表達(dá)量下降(P0.05);間接共培養(yǎng)損傷組較損傷組相比,培養(yǎng)基上清液中KGF因子表達(dá)量增加(P0.05)。3.MSC旁分泌KGF修復(fù)上皮損傷可能與調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞的RAGE表達(dá)有關(guān)。在1d,3d的時(shí)間點(diǎn)各組上皮細(xì)胞RAGE表達(dá),WB結(jié)果顯示間接共培養(yǎng)損傷組較損傷組相比,RAGE蛋白表達(dá)量有所上升(P0.05);損傷組基礎(chǔ)上加入KGF的KGF組較損傷組相比,RAGE蛋白表達(dá)量明顯增加(P0.05)。在1d、3d、7d的3個(gè)時(shí)間點(diǎn),各組條件培養(yǎng)基中RAGE的表達(dá),ELISA結(jié)果顯示損傷組較空白組相比,培養(yǎng)基上清液中RAGE因子表達(dá)量下降(P0.05);間接共培養(yǎng)損傷組較間損傷組相比,培養(yǎng)基上清液中RAGE因子表達(dá)量上升(P0.05);損傷組基礎(chǔ)上加入KGF的KGF組較損傷組相比,培養(yǎng)基上清液中RAGE因子表達(dá)量明顯上調(diào)。結(jié)論:1.BMSC對LPS誘導(dǎo)MLE12細(xì)胞損傷有修復(fù)作用。2.BMSC旁分泌產(chǎn)生KGF因子在修復(fù)LPS誘導(dǎo)的MLE-12細(xì)胞損傷有重要作用,是肺泡上皮損傷修復(fù)的主要決定因素。3.BMSC旁分泌KGF修復(fù)LPS誘導(dǎo)MLE-12細(xì)胞損傷可能通過調(diào)節(jié)肺泡上皮細(xì)胞的RAGE表達(dá)實(shí)現(xiàn),因此RAGE可能是MSC旁分泌KGF修復(fù)ARDS時(shí)肺泡上皮損傷的關(guān)鍵分子。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 急性呼吸窘迫綜合征 角質(zhì)細(xì)胞生長因子 晚期糖基化終末產(chǎn)物受體 脂多糖
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563.8
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-11
• 第一章、主要實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑11-14
• 1.1、實(shí)驗(yàn)細(xì)胞11
• 1.2、主要器材11
• 1.3、主要試劑11-12
• 1.4、主要試劑配制12-14
• 第二章、實(shí)驗(yàn)方法14-21
• 2.1 建立脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠肺泡上皮細(xì)胞（MLE-12）損傷模型14-15
• 2.2 建立體外間接共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?/span>15-16
• 2.3 體外培養(yǎng)模型的分組與處理16-17
• 2.4 WB檢測各組MLE12細(xì)胞中RAGE和ZO-1 的蛋白表達(dá)水平17-21
• 第三章、結(jié)果21-36
• 3.1 實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)一般概述21-24
• 3.2 WB檢測各組MLE12細(xì)胞中RAGE和ZO-1 的蛋白表達(dá)水平24-29
• 3.3 ELISA法檢測各組培養(yǎng)基上清液中KGF，RAGE的含量29-36
• 第四章、討論36-48
• 第五章、結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 縮略詞表55-57
• 文獻(xiàn)綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果65-66
• 致謝66-67

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2 王微;王偉;彭玉蘭;劉莉;周永巧;陳彩宇;于長青;何多芬;曾春雨;;脯氨酸羥化酶2對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌介導(dǎo)的心肌保護(hù)的影響[J];中華高血壓雜志;2012年03期

3 馬斌 ,劉亮;腎上腺髓質(zhì)素可能是一種心室肌自分泌或旁分泌激素[J];白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

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本文編號：725341