本文關(guān)鍵詞：噬菌體治療耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：【目的】以鮑曼不動(dòng)桿菌為代表的非發(fā)酵菌成為21世紀(jì)院內(nèi)感染的主要致病菌,由于日益嚴(yán)重的耐藥形勢(shì),人類已接近無(wú)藥可用的境地。近年已有百年歷史的噬菌體治療再次引起廣泛關(guān)注,希望從中尋求克服細(xì)菌耐藥的新途徑。本研究我們將采用前期篩選的、生物學(xué)信息明確、已進(jìn)行全基因組測(cè)序并在Genbank上注冊(cè)的噬菌體IME-AB2,治療多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌小鼠肺炎,系統(tǒng)評(píng)價(jià)該株噬菌體用于體內(nèi)治療的有效性和安全性。研究結(jié)果將為耐藥性鮑曼不動(dòng)桿菌的治療提供新思路和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),研究方法將為噬菌體的個(gè)體化治療提供技術(shù)支持�！痉椒ā堪凑瘴墨I(xiàn)報(bào)道環(huán)磷酰胺300 mg/kg腹腔注射預(yù)處理BALB/c小鼠,根據(jù)最小致死量確定鮑曼不動(dòng)桿菌的致傷劑量2×108CFU/m L,滴鼻法構(gòu)建小鼠肺炎模型;治療組給予噬菌體滴鼻治療,PBS滴鼻作為對(duì)照。采用小鼠生存分析、肺部Micro-CT、肺臟組織病理學(xué)等指標(biāo)評(píng)價(jià)治療效果,同時(shí)進(jìn)行噬菌體治療的劑量效果分析和時(shí)間效果分析;分析比較小鼠肺臟組織中細(xì)菌和噬菌體計(jì)數(shù)的動(dòng)態(tài)變化探討治療機(jī)制;觀察小鼠臨床癥狀評(píng)分、脾臟和肝臟病理學(xué)改變、滴定小鼠血液中的噬菌體抗體,進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)�！窘Y(jié)果】根據(jù)臨床癥狀評(píng)分和肺部Micro-CT觀察,本研究成功構(gòu)建了多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎的小鼠模型。小鼠致傷后1 h給予感染復(fù)數(shù)MOI=10的噬菌體劑量治療,小鼠全部存活,PBS對(duì)照組小鼠在感染后60-144小時(shí)內(nèi)全部死亡,半數(shù)小鼠在83小時(shí)內(nèi)死亡,兩組比較P0.001。小鼠致傷后1 h分別采用感染復(fù)數(shù)為MOI=10、1和0.1劑量的噬菌體進(jìn)行治療,240 h的存活率分別是100%、70%和20%;將治療劑量固定為MOI=10,分別在致傷后1、4和24h給與治療生存率分別為100%,60%,20%,顯示了噬菌體治療良好的劑量依賴性和時(shí)間依賴性。肺部Micro-CT顯示試驗(yàn)組小鼠的肺部浸潤(rùn)不僅范圍小而且程度輕。肺臟組織病理學(xué)顯示對(duì)照組小鼠肺部組織出血、水腫及白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯加重,并可見大范圍實(shí)變。2-144 h觀察期內(nèi)的各個(gè)時(shí)間點(diǎn),治療組肺組織勻漿中細(xì)菌計(jì)數(shù)均明顯低于對(duì)照組,并且呈進(jìn)行性下降,隨著細(xì)菌計(jì)數(shù)的下降噬菌體數(shù)量也呈下降趨勢(shì)。以癥狀分值評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)小鼠的一般狀況,治療組在前期也呈下降趨勢(shì),但36小時(shí)后逐漸好轉(zhuǎn)直至痊愈,而對(duì)照組則持續(xù)惡化直至死亡,兩組比較P0.001。環(huán)磷酰胺腹腔注射后小鼠脾臟明顯縮小,噬菌體治療可使縮小的脾臟復(fù)原甚至更大,噬菌體治療216 h后可以檢測(cè)到噬菌體中和抗體。【結(jié)論】噬菌體IME-AB2對(duì)多種耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌引起的肺炎小鼠具有良好的治療效果,且安全性良好,值得進(jìn)一步研究開發(fā)。噬菌體具有免疫原性,靜脈注射和多次給藥的使用策略有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：噬菌體 鮑曼不動(dòng)桿菌 肺炎 小鼠模型
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R563.1
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第一章 前言8-9
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法9-13
• 2.1 菌液制備9-10
• 2.1.1 鮑曼不動(dòng)桿菌裂解性噬菌體IME-AB2的擴(kuò)大培養(yǎng)9
• 2.1.2 鮑曼不動(dòng)桿菌裂解性噬菌體IME-AB2的濃縮及純化9
• 2.1.3 鮑曼不動(dòng)桿菌裂解性噬菌體IME-AB2滴度測(cè)定9-10
• 2.2 鮑曼不動(dòng)桿菌致小鼠肺炎模型的建立10
• 2.2.1 小鼠免疫抑制的處理10
• 2.2.2 鮑曼不動(dòng)桿菌小鼠肺部感染最小給菌劑量的確立10
• 2.3 噬菌體治療的最佳時(shí)間與劑量實(shí)驗(yàn)10-11
• 2.3.1 噬菌體最佳治療劑量的確立10-11
• 2.3.2 噬菌體最佳治療時(shí)間的確立11
• 2.4 噬菌體治療小鼠鮑曼不動(dòng)桿菌肺炎效果評(píng)價(jià)11-12
• 2.4.1 分組及處理方案11
• 2.4.2 小鼠肺部組織中細(xì)菌和噬菌體數(shù)量變化11-12
• 2.4.3 小鼠臟器組織病理學(xué)觀察12
• 2.5 噬菌體治療后血清中抗噬菌體抗體研究12
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法12-13
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果13-23
• 3.1 免疫抑制小鼠肺炎模型的建立13
• 3.2 鮑曼不動(dòng)桿菌致死劑量的確定13
• 3.3 噬菌體治療的劑量和時(shí)間依賴性13-14
• 3.4 噬菌體治療小鼠生存曲線分析和臨床效果評(píng)價(jià)14-16
• 3.5 噬菌體治療后小鼠肺內(nèi)細(xì)菌和噬菌體的動(dòng)態(tài)變化分析16-17
• 3.6 實(shí)驗(yàn)小鼠肺、肝及脾臟組織病理學(xué)檢查17-18
• 3.7 實(shí)驗(yàn)小鼠的微型電子計(jì)算機(jī)斷層掃描儀觀察18-19
• 3.8 噬菌體治療后小鼠脾臟重量變化19-20
• 3.9 滴鼻感染噬菌體小鼠血清中抗噬菌體抗體的檢測(cè)20-21
• 3.10 實(shí)驗(yàn)小鼠肺和血清中炎癥因子檢測(cè)21-23
• 第四章 討論23-25
• 第五章 研究結(jié)論25-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 附件28-30
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷30-31
• 致謝31

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