本文關(guān)鍵詞：無(wú)創(chuàng)清醒挪威褐鼠過(guò)敏性哮喘模型建立及應(yīng)用雷公藤多苷治療的探索

  更多相關(guān)文章： 過(guò)敏性哮喘 Penh 速發(fā)相反應(yīng) 遲發(fā)相反應(yīng) 雷公藤多苷

【摘要】：目的建立卵蛋白(OVA)致敏激發(fā)后,在挪威褐鼠無(wú)創(chuàng)且清醒的狀態(tài)下,可觀察和記錄到過(guò)敏性哮喘發(fā)作全過(guò)程即速發(fā)相(EAR)和遲發(fā)相(LAR)的動(dòng)物模型。并應(yīng)用此模型,研究雷公藤多苷(GTW)對(duì)過(guò)敏性哮喘EAR和LAR的影響,初步探討其可能的作用機(jī)制。方法第一部分：模型建立66只挪威褐鼠按致敏液(OVA和Al(OH)3)不同平均分為11組,單純注射OVA的4組(0.01、0.1、1和10mg/只)；OVA混合Al(OH)3干粉的5組(0.1+100、1+100、10+100、1+52和1+4 mg/只)；OVA混合A1(OH)3膠體的1組(10+4 mg/只)；正常對(duì)照組1組。于第0天和第5天在每只動(dòng)物背部選取2點(diǎn)進(jìn)行皮下注射,對(duì)10個(gè)致敏組注射相應(yīng)致敏液,對(duì)正常對(duì)照組注射生理鹽水,每點(diǎn)均注射0.2m1。在第37天,所有動(dòng)物霧化吸入5%OVA 10 min激發(fā)。然后立即放入體積描記器中連續(xù)記錄16h呼氣相延長(zhǎng)參數(shù)(Penh)值,繪制Penh變化曲線,計(jì)算EAR Penh曲線下面積(AUC)、LAR AUC、EAR峰值、LAR峰值、LAR持續(xù)時(shí)間和EAR及LAR出現(xiàn)次數(shù)。采集第0、7、14、21、28、35、38天血清,用ELISA法檢測(cè)血清中特異性IgE含量。HE染色觀察肺病理改變。第二部分：藥物治療30只挪威褐鼠平均分為5組,即正常對(duì)照組、模型組和3個(gè)GTW組。采用OVA致敏激發(fā)挪威褐鼠,清醒動(dòng)物體積描記器記錄16 h反映氣道阻力變化的Penh值,計(jì)算EAR AUC、LAR AUC、LAR持續(xù)時(shí)間,建立無(wú)創(chuàng)清醒挪威褐鼠過(guò)敏性哮喘發(fā)作全程記錄模型。3個(gè)GTW組動(dòng)物分別于第30至第37天灌胃給予GTW10、50和200mg·kg-1,每次2 mL,每天1次。正常對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水。HE染色觀察肺、肝和腎臟病理改變。檢測(cè)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、肌酐(CR)、血清尿素氮(BUN)值,分析藥物肝腎毒性。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法(RT2 Profiler PCR Array Rat Allergy Asthma)篩選差異表達(dá)基因。結(jié)果第一部分：模型建立除單純注射OVA 0.01mg組外,其他各組大鼠血清特異性IgE含量均比正常對(duì)照組顯著升高(P0.05),且在致敏1周后IgE開(kāi)始大量產(chǎn)生,直到第5周均呈持續(xù)增長(zhǎng)趨勢(shì)(以O(shè)VA 10+Al(OH)3100組為例)。觀察到了哮喘發(fā)作的速發(fā)和遲發(fā)雙相氣道反應(yīng),其特點(diǎn)表現(xiàn)在Penh值的顯著增高,且與正常對(duì)照組相比,模型組(以O(shè)VA 10+Al(OH)3100、OVA 10+Al(OH)3 gel 4組為例)的EAR峰值、LAR峰值、LAR持續(xù)時(shí)間、EAR AUC和LARAUC均顯著增大(P0.05)。模型組(以O(shè)VA 10+Al(OH)3100組為例)有以氣道周圍嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的炎癥表現(xiàn)。第二部分：藥物治療在給予GTW 50 mg·kg1治療后特異性IgE含量比模型組顯著降低(P0.05)。給予GTW 10.50 和 200 mg·kg-1治療后,EAR AUC.LAR AUC.LAR持續(xù)時(shí)間均比模型組顯著降低(P0.05)；生化指標(biāo)ALT均比模型組顯著升高(P0.05),且隨藥物劑量增加,ALT數(shù)值增大；CR數(shù)值也均比模型組顯著升高(P0.05)；AST和BUN兩個(gè)指標(biāo)在給藥后沒(méi)有明顯變化；均未對(duì)肝腎造成明顯毒性病理改變。GTW能減輕肺部嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),且隨劑量增加嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量減少。GTW能使過(guò)敏性哮喘中異常調(diào)節(jié)的基因發(fā)生明顯改善,其中變化最明顯的基因?yàn)镸mp9,在藥物治療后出現(xiàn)明顯下調(diào),且下調(diào)強(qiáng)度有劑量依賴性增強(qiáng)的趨勢(shì),在給予GTW 10、50和200 mg.kg1治療后,下調(diào)3.62、7.67、38.15倍(P0.05)。結(jié)論在OVA激發(fā)后觀察到了哮喘發(fā)作全程,成功建立了非創(chuàng)傷性、清醒狀態(tài)挪威褐鼠的過(guò)敏性哮喘發(fā)作全程記錄模型。確立以穩(wěn)定出現(xiàn)哮喘EAR和LAR的OVA 10+Al(OH)3100組方法為本模型的最佳造模方法。發(fā)現(xiàn)GTW能減輕哮喘發(fā)作時(shí)的EAR和LAR,對(duì)哮喘有治療作用,其可能主要通過(guò)下調(diào)Mmp9的表達(dá)而達(dá)到治療目的；同時(shí)也表明該模型可以作為一個(gè)較好的工具應(yīng)用于哮喘治療研究。
【關(guān)鍵詞】：過(guò)敏性哮喘 Penh 速發(fā)相反應(yīng) 遲發(fā)相反應(yīng) 雷公藤多苷
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 文獻(xiàn)綜述10-24
• 過(guò)敏性哮喘動(dòng)物模型研究進(jìn)展10-18
• 參考文獻(xiàn)15-18
• 雷公藤內(nèi)酯醇治療過(guò)敏性哮喘的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展18-24
• 參考文獻(xiàn)21-24
• 前言24-32
• 一、研究背景24-29
• 二、研究目的和意義29-30
• 三、研究?jī)?nèi)容及技術(shù)路線30-32
• 第一部分 無(wú)創(chuàng)清醒挪威褐鼠過(guò)敏性哮喘發(fā)作全程記錄模型的建立32-48
• 材料與方法32-37
• 1 材料32-34
• 1.1 動(dòng)物32
• 1.2 主要試劑32-33
• 1.3 主要溶液配制33-34
• 1.4 主要儀器34
• 2 實(shí)驗(yàn)方法34-37
• 2.1 致敏及分組處理34-35
• 2.2 血清采集35
• 2.3 支氣管激發(fā)試驗(yàn)及肺組織取材35-36
• 2.4 ELISA法檢測(cè)IgE抗體36
• 2.5 HE染色觀察肺病理變化36-37
• 2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析方法37
• 結(jié)果37-44
• 1 特異性IgE結(jié)果37-40
• 2 哮喘發(fā)作全過(guò)程記錄結(jié)果40-43
• 3 肺組織病理檢測(cè)結(jié)果43-44
• 討論44-47
• 小結(jié)47-48
• 第二部分 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠的治療作用48-67
• 材料與方法48-57
• 1 材料48-51
• 1.1 動(dòng)物48
• 1.2 主要試劑48-49
• 1.3 主要溶液配制49-51
• 1.4 主要儀器51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-57
• 2.1 哮喘模型的建立及分組處理51-52
• 2.2 ELISA法檢測(cè)血清特異性IgE52-53
• 2.3 HE染色觀察肺、肝和腎組織病理改變53
• 2.4 血生化指標(biāo)檢測(cè)53
• 2.5 Real-Time PCR方法檢測(cè)肺組織84個(gè)哮喘相關(guān)基因表達(dá)53-56
• 2.6 統(tǒng)計(jì)分析方法56-57
• 結(jié)果57-63
• 1 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠哮喘速發(fā)相、遲發(fā)相的影響57-59
• 2 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠特異性IgE的影響59
• 3 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠肺、肝和腎組織的影響59-61
• 4 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠肝和腎血生化指標(biāo)的影響61-62
• 5 雷公藤多苷對(duì)過(guò)敏性哮喘挪威褐鼠哮喘相關(guān)基因表達(dá)的影響62-63
• 討論63-66
• 小結(jié)66-67
• 全文總結(jié)67-68
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 縮略詞表72-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及發(fā)表文章74-75
• 致謝75-76

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本文編號(hào)：697650