沙眼衣原體質(zhì)粒在呼吸道感染中的作用及其機制初步研究
本文關(guān)鍵詞:沙眼衣原體質(zhì)粒在呼吸道感染中的作用及其機制初步研究
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【摘要】:第一部分沙眼衣原體質(zhì)粒缺陷菌株感染人呼吸道上皮細胞的生長特性分析目的:分析沙眼衣原體質(zhì)粒缺陷菌株感染人呼吸道上皮細胞的形態(tài)及生長動態(tài)。方法:用流行的人生殖道沙眼衣原體血清型D野生菌株(wild type,WT)及其相應(yīng)的質(zhì)粒缺陷菌株(plasmid-free,PF)建立人肺支氣管上皮BEAS-2B細胞感染模型,分別測定各衣原體菌株具有感染性的子代原體的動態(tài)變化、繪制生長曲線,用間接免疫熒光觀察不同感染時間點包涵體形態(tài)。結(jié)果:間接免疫熒光結(jié)果顯示,有質(zhì)粒株較無質(zhì)粒株的包涵體形態(tài)更大。生長曲線結(jié)果顯示不同菌株的生長趨勢一致,但有質(zhì)粒菌株產(chǎn)生和釋放衣原體子代感染性顆粒更多。結(jié)論:有無質(zhì)粒衣原體菌株在呼吸道上皮的生長狀況不同,提示衣原體質(zhì)粒直接介導(dǎo)宿主細胞-沙眼衣原體相互作用,對衣原體子代感染性顆粒的釋放和感染傳播有作用。第二部分沙眼衣原體質(zhì)粒在新生鼠肺炎中的作用目的:模擬垂直傳播導(dǎo)致的呼吸道感染,構(gòu)建沙眼衣原體新生鼠肺炎模型并探討衣原體質(zhì)粒對致病力的影響。方法:將出生24h內(nèi)的48只BALB/c新生鼠隨機分成4組,每組12只,WT組感染有質(zhì)粒的沙眼衣原體血清型D野生菌株,PF組感染同型無質(zhì)粒菌株,磷酸鹽緩沖液(PBS)組予相同劑量PBS處理,正常組無處理。于4、7、11d各處死4只取標(biāo)本,逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測肺組織內(nèi)omp A基因m RNA水平;肺組織蘇木素-伊紅(HE)染色及病理評分;髓過氧化物酶(MPO)免疫組化染色分析肺中性粒細胞浸潤情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測TNF-α及IFN-γ。報告基因分泌型胚胎堿性磷酸酶(SEAP)實驗體外檢測TLR2、NF-κB激活。結(jié)果:感染后肺組織衣原體培養(yǎng)陰性,而omp A基因m RNA檢測及MPO免疫組化染色陽性,證實WT及PF菌株皆可感染新生鼠肺,引起間質(zhì)性改變伴中性粒細胞浸潤,PF組的肺組織病理評分(1.10±0.19)及PMN計數(shù)(21.06±10.92)均低于WT組(分別為1.44±0.17和43.90±17.17),P值分別為0.048和0.005;ELISA示W(wǎng)T組新生鼠肺內(nèi)TNF-α(623.35±37.23)和IFN-γ(2206.83±854.22)水平較對照組(分別為470.93±20.83和737.97±79.89)升高(P值分別為0.000和0.038),而PF組(分別為531.59±34.14和1099.86±427.39)與對照組比較,無統(tǒng)計學(xué)差異(P值均0.05);SEAP實驗顯示,PF株可激活TLR2信號(F=483.199,P=0.000),但程度較WT組有下降(P=0.000),激活NF-κB的能力明顯受限(F=229.884,P=1.000),與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:沙眼衣原體質(zhì)粒缺乏使其感染肺部的致病力減弱,可能與衣原體質(zhì)粒潛在的致病因子影響TLR2及NF-κB的活化有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】:沙眼衣原體 隱匿質(zhì)粒 上皮細胞 沙眼衣原體 肺炎 隱匿質(zhì)粒 新生鼠
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R56
【目錄】:
- 英漢縮略語名詞對照4-6
- 中文摘要6-9
- 英文摘要9-12
- 前言12-16
- 參考文獻14-16
- 第一部分 沙眼衣原體質(zhì)粒缺陷菌株感染人呼吸道上皮細胞的特性分析16-27
- 前言16-17
- 1 材料與方法17-19
- 2 結(jié)果19-22
- 3 討論22-24
- 參考文獻24-27
- 第二部分 沙眼衣原體質(zhì)粒在新生鼠肺炎中作用的初步研究27-41
- 前言27-28
- 1 材料和方法28-33
- 2 結(jié)果33-37
- 3 討論37-39
- 參考文獻39-41
- 全文總結(jié)41-42
- 文獻綜述42-49
- 參考文獻46-49
- 致謝49-50
- 攻讀學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50
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,本文編號:678304
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