本文關(guān)鍵詞：采用ChIP-chip技術(shù)分析大鼠肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化前后全基因組蛋白H3K4三甲基化水平的改變

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【摘要】：目的研究經(jīng)二氧化硅(Si O_2)染毒的肺成纖維細(xì)胞(LF)轉(zhuǎn)分化前后全基因組蛋白H3賴氨酸4(H3K4)三甲基化(met3)水平的改變。方法原代培養(yǎng)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞(AM)和LF,采用transwell共培養(yǎng),建立共培養(yǎng)模型,用100 mg·L~(-1)游離Si O_2粉塵染毒AM 24 h,收集LF細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法對(duì)轉(zhuǎn)分化后的LF進(jìn)行表型鑒定。采用染色質(zhì)免疫共沉淀聯(lián)合芯片技術(shù)(Ch IP-chip)對(duì)LF全基因組蛋白H3K4met3進(jìn)行高通量篩選,采用染色質(zhì)免疫共沉淀-實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)(Ch IP-q PCR)驗(yàn)證芯片結(jié)果,采用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)(q RT-PCR)檢測(cè)H3K4出現(xiàn)顯著差異的m RNA表達(dá)水平。結(jié)果通過對(duì)經(jīng)Si O_2染毒前后LF全基因組蛋白H3K4met3水平的對(duì)比,共篩選出1815個(gè)基因存在H3K4顯著性差異(Cy3/Cy5比值2.0或0.5,Nimble Scan V2.5軟件),其中518個(gè)基因出現(xiàn)H3K4met3程度增高,1297個(gè)基因H3K4met3程度降低。隨機(jī)挑選2個(gè)差異表達(dá)基因nfib和kpna3,以Ch IP-q PCR和q RT-PCR方法驗(yàn)證,取得與Cp G島芯片一致的結(jié)果。結(jié)論經(jīng)Si O_2染毒的LF轉(zhuǎn)分化前后全基因組蛋白H3K4met3水平存在顯著改變。Ch IP-chip技術(shù)有利于進(jìn)一步揭示矽肺纖維化發(fā)生的分子機(jī)制,有助于發(fā)現(xiàn)新的蛋白標(biāo)志物和基因干預(yù)靶點(diǎn)。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 成纖維細(xì)胞 二氧化硅 肺泡巨噬細(xì)胞 染色質(zhì)免疫共沉淀 組蛋白H賴氨酸 甲基化
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81102109);國家自然科學(xué)基金(81472954)~~
【分類號(hào)】：R563
【正文快照】： 目前,塵肺病仍是中國最嚴(yán)重的職業(yè)病,而矽肺是塵肺病中危害最嚴(yán)重的一種。長(zhǎng)期吸入游離二氧化硅(Si O2)粉塵,導(dǎo)致肺成纖維細(xì)胞(lung fi-broblast,LF)轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細(xì)胞(myofibro-blast,MF)是矽肺發(fā)病重要的細(xì)胞基礎(chǔ)[1]。細(xì)胞轉(zhuǎn)分化是指分化完全的細(xì)胞在某些因素的刺激下,丟

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2 葉青;葉燕青;李艷麗;;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

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4 徐煒烽;廉姜芳;黃曉燕;金麗華;;CTGF誘導(dǎo)的人胚肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中PI3K/Akt與p38MAPK磷酸化的關(guān)系[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2012年03期

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1 盧森;乙酰化修飾JAK2/STAT3對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)小鼠肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化影響的機(jī)制研究[D];東南大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：668966