本文關鍵詞：人羊膜間充質(zhì)干細胞靜脈移植對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響

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【摘要】：第一部分哮喘小鼠動物模型的制備目的:雞卵清白蛋白(OVA)腹腔聯(lián)合皮下注射致敏和霧化激發(fā)小鼠,制備哮喘模型。方法:將BALB/c雌性小鼠隨機分為哮喘組(AS)和生理鹽水對照組(NS),每組7只。兩組小鼠于第1、13天分別以OVA和生理鹽水腹腔聯(lián)合皮下注射致敏,第19d分別予10%OVA溶液、生理鹽水連續(xù)霧化激發(fā)5d,末次激發(fā)24h后處死小鼠。測定小鼠BALF細胞總數(shù)和細胞分類計數(shù),采用ELISA檢測BALF的IL-5、IL-12、IL-17水平,HE染色觀察肺組織病理學改變,AB-PAS染色觀察氣道上皮杯狀細胞和黏液物質(zhì)改變,VG染色觀察氣道周圍膠原纖維沉積,免疫組化染色和實時定量PCR檢測肺組織Muc5ac蛋白和m RNA表達水平。結(jié)果:AS組小鼠BALF細胞總數(shù)、細胞分類計數(shù)、IL-5、IL-17表達水平、氣道炎癥細胞浸潤評分、氣道壁厚度、氣道上皮杯狀細胞及黏液物質(zhì)陽性相對著色面積、氣道周圍膠原纖維陽性相對著色面積、Muc5ac蛋白及m RNA表達均高于NS組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。IL-12表達水平低于NS組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。結(jié)論:以OVA腹腔聯(lián)合皮下注射致敏和霧化吸入激發(fā)可成功復制小鼠哮喘模型。第二部分人羊膜間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)及鑒定目的:從人羊膜組織中分離、純化及鑒定間充質(zhì)干細胞。方法:收集健康足月剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦新鮮胎盤,采用機械聯(lián)合胰蛋白酶-膠原酶消化法分離人羊膜間充質(zhì)干細胞(h AMSCs),通過貼壁、酶消化法進行傳代培養(yǎng),觀察P1~P3代細胞形態(tài),傳至第三代的h AMSCs,采用流式細胞術(FCM)鑒定細胞表型特征。結(jié)果:h AMSCs呈典型貼壁生長,纖維狀,長梭形。第3代h AMSCs高表達CD90,CD105,CD44,CD73,幾乎不表達CD34,CD11b,CD19,CD45和HLA-DR。結(jié)論:從體外成功分離培養(yǎng)出人羊膜間充質(zhì)干細胞。第三部分人羊膜間充質(zhì)干細胞靜脈移植對哮喘小鼠氣道的影響目的:觀察人羊膜間充質(zhì)干細胞靜脈移植對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響。方法:將35只雌性BALB/c小鼠按隨機數(shù)字法分為NS組、AS組、人羊膜間充質(zhì)干細胞干預組(AS+h AMSCs)、人羊膜間充質(zhì)干細胞自身對照組(NS+h AMSCs)、地塞米松干預組(AS+DEX),每組7只。AS組和NS組處理同第一部分。AS+h AMSCs組在第1次致敏后第18d通過尾靜脈注射Brdu標記的第3代h AMSCs懸液(1×106)0.25ml/只,余處理同AS組;NS+h AMSCs組第18d經(jīng)尾靜脈注射Brdu標記的第3代h AMSCs懸液(1×106)0.25ml/只,余處理同NS組;AS+DEX組于每日霧化激發(fā)前30min,予地塞米松2mg/kg腹腔注射,余處理同AS組;檢測各組小鼠BALF細胞總數(shù)和細胞分類計數(shù),ELISA測定IL-5、IL-12、IL-17水平變化,免疫熒光染色觀察h AMSCs經(jīng)Brdu標記率及h AMSCs在體內(nèi)定植情況;HE,AB-PAS,VG,免疫組化染色和實時定量PCR檢測指標同第一部分。結(jié)果:免疫熒光染色在兩組小鼠體內(nèi)均可檢測到h AMSCs的定植,以AS+h AMSCs組肺組織細胞定植明顯。AS+h AMSCs組BALF細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞百分比、IL-5、IL-17水平、氣道周圍炎癥細胞浸潤評分、氣道壁厚度、氣道周圍膠原纖維沉積面積、氣道上皮杯狀細胞和黏液物質(zhì)陽性相對著色面積、肺組織Muc5ac蛋白及Muc5ac m RNA表達水平均較AS組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);較NS組增高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。IL-12表達水平較AS組升高,較NS組降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。NS+h AMSCs組與NS組比較,各指標差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.h AMSCs靜脈移植能歸巢至小鼠肺組織,以哮喘組明顯。2.h AMSCs干預可減輕哮喘氣道炎癥及氣道重塑,其機制可能是通過抑制IL-5、IL-17的表達促進IL-12表達而調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡及抑制Th17細胞功能及修復受損細胞。
【關鍵詞】：OVA 哮喘 小鼠 動物模型 哮喘 人羊膜間充質(zhì)干細胞 Muc5ac Th1/Th2 IL-17 羊膜間充質(zhì)干細胞 h AMSCs 流式細胞術
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R562.25
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 哮喘小鼠模型的制備15-48
• 1.材料與方法15-27
• 2.結(jié)果27-41
• 3.討論41-44
• 4.結(jié)論44-45
• 參考文獻45-48
• 第二部分 人羊膜間充質(zhì)干細胞原代、傳代培養(yǎng)及鑒定48-59
• 1.材料與方法48-52
• 2.結(jié)果52-55
• 3.討論55-57
• 4.結(jié)論57-58
• 參考文獻58-59
• 第三部分 人羊膜間充質(zhì)干細胞靜脈移植對哮喘小鼠氣道炎癥及氣道重塑的影響59-83
• 1.材料與方法59-63
• 2.結(jié)果63-75
• 3.討論75-79
• 4.結(jié)論79-80
• 參考文獻80-83
• 附圖83-87
• 綜述87-97
• 參考文獻92-97
• 致謝97-99
• 作者簡介99

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本文編號：654587